[发明专利]一种新的多肽——人细胞骨架相关蛋白11.33和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人细胞骨架相关蛋白11.33，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

Ral-GTPase，RalA，RalB，构成了Ras相关GTP结合蛋白家族。和所有的GTPase一样，Ral蛋白与GTP结合后表现出活性，与GDP结合后不表现活性。Ral蛋白的活化与其和一种鸟嘌呤核苷交换因子的相互作用有关，Ral在胞内主要起到调控GTP水平的作用，而GTP是提供所有生物活动的能量来源。(The Journal OFBiological Chemistry 1997 Vol272；No50；Dec12 31230-31234)

RalBP1(也称RLIP或RLP)被证明可结合于活化的GTP-Ral蛋白，影响Ral蛋白的表达，同时它是CDC42/Rac的GAP，可以影响肌动蛋白作为细胞骨架，也可以影响一些激酶的信号传导途径。(The Journal OF Biological Chemistry1997 Vol272；No50；Dec12  31230-31234)

下图示意为RalBP1

         CDC42/Rac GAP              Ral binding  Reps binding

Reps1是RalBP1的结合蛋白之一，根据研究，它包括一个EH功能域(Epshomology domain)，一个SH3功能域和一个RalBP1结合区。研究结果显示，Reps1和RalBP1在细胞内能形成稳定的复合物。(The Journal OF Biological Chemistry1997 Vol272；No50；Dec12 31230-31234)

下图示意为Reps1

           EH    SH3 binding                   RalBP1 binding

EH功能域(Eps homology domain)是真核生物的信号识别区之一，它可以辨别含有Asn-Pro-Phe(NPF)序列的蛋白，根据异核磁共振的波谱分析，EH功能域的结构基础为一对EF手性结构，这一结构使得EH功能域在蛋白相互作用、生长因子信号传递等过程中起调控作用。(Science 1998 Aug 28；281(5381)：1357-60)

Reps1与SH3功能域蛋白有相互作用，Reps1被推测有SH3结合活性，在已发现的Reps1氨基酸531-540位的P-A-V-P-P-R，此结构被认为可与Crk和Grb2的SH3结合。Reps1可通过配适蛋白Crk和Grb2，与EGF受体形成复合物，但具体的过程还不清楚。(The Journal OF Biological Chemistry 1997 Vol272；No50；Dec12 31230-31234)

EGF可以诱导Eps的酪氨酸磷酸化，同样我们推测EGF可以诱导Reps1的酪氨酸磷酸化，实验的结果证明了这一点。(The Journal OF Biological Chemistry1997 Vol272；No50；Dec12 31230-31234)

Reps1可以调节RalBP1的功能，从而间接调控胞内Ral蛋白的表达。因此，Reps1可以调控GTP在胞内的表达量，从而影响生命活动的很多方面；Reps1可以对蛋白相互作用、生长因子传导等有作用；Reps1可以影响肌动蛋白作为细胞骨架；Reps1也可以影响一些激酶的信号传递；Reps1还可以与EGF有相互作用。

根据氨基酸同源比较的结果，本发明的多肽被推断鉴定为人细胞骨架相关蛋白11.33(HReps82)。

通过基因芯片的分析发现，在正常脑、肝癌、肌肉、胎脑、胎肾，胎肺、胎肝、甲状腺、胸腺、成人肝、肺、胶质瘤中，本发明的多肽的表达谱与人RalBP1相关蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人细胞骨架相关蛋白11.33。

由于如上所述人细胞骨架相关蛋白11.33蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人细胞骨架相关蛋白11.33蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人细胞骨架相关蛋白11.33蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。