[发明专利]一种多肽——硫氨焦磷酸激酶－26.73和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——硫氨焦磷酸激酶-26.73，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

硫氨焦磷酸激酶在5-三磷酸腺苷成为磷酸盐的反应中催化了硫氨的焦磷酸化。鼠硫氨焦磷酸激酶cDNA克隆(mTPK1)采用了数据库分析鼠的表达序列，一个两步法的聚合酶反应，并用酵母硫氨焦磷酸激酶缺乏的突变株进行功能互补筛选。经测算此蛋白含有243氨基酸残基并且分子量为27068。维生素B1是一种水溶性维生素，一般含有四种行式：维生素B1，单磷酸维生素B1，焦磷酸维生素B1(TDP)，三磷酸维生素B1。维生素B1是动物血浆中维生素的主要成分，它能通过介质携带穿过膜而到达细胞内。在细胞内，维生素B1磷酸化成焦磷酸维生素B1(TDP)，TDP也是在动物体内最普遍的存在行式。TDP也是丙酮盐脱氢酶，2-酮戊二酸脱氢酶，以及转酮醇酶辅助因子。这些来自不同细胞的TDP依赖性酶的一级结构和构造已经充分被研究，TDP作为一个醛族的瞬间介质，它的一级结构和构造已经被标识。在一些由于缺乏维生素B1而引起的疾病如脚气病和Wernicke-Korsakoff综合症中，减弱一个或几个TDP依赖性酶的活性作为细胞修复功能的解决方法。而且，TDP是三磷酸维生素B1的前体，它被认为在二乙基溴乙酰胺的活性中起特殊作用。

哺乳动物的维生素新陈代谢是在细胞体内四种维生素行式水平的调节，这种调节主要表现为膜关联的维生素运输系统和细胞内的进行硫氨焦磷酸化的酶-硫氨焦磷酸激酶(TPK)。通过生物化学的分析认为在哺乳动物中有几种维生素的运输系统，在几种细胞中还有使维生素催化成TDP的能力。最近哺乳动物的维生素运输蛋白THTR-1鉴定出维生素依赖性巨成红细胞缺乏症的基因的突变体。从各种哺乳动物中分离得到TPK的cDNA和染色体组，证明了TPK在维生素新陈代谢和对高等动物的调节作用。

本发明的人的该激酶与人硫氨焦磷酸激酶在蛋白水平上有的38％相同性和59％的相似性。且两者均含有拓扑异构酶家族的特征性结构域。基于以上各点，故认为本发明的蛋白为硫氨焦磷酸激酶，命名为硫氨焦磷酸激酶-26.73。并以此推断其与硫氨焦磷酸激酶相似，同为硫氨焦磷酸激酶家族的成员，并具有相似的生物学功能。其突变或表达异常将导致相关代谢途径的异常，进而引发各种相关的疾病。

由于如上所述硫氨焦磷酸激酶-26.73蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的硫氨焦磷酸激酶-26.73蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新硫氨焦磷酸激酶-26.73蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——硫氨焦磷酸激酶-26.73以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码硫氨焦磷酸激酶-26.73的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码硫氨焦磷酸激酶-26.73的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产硫氨焦磷酸激酶-26.73的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——硫氨焦磷酸激酶-26.73的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——硫氨焦磷酸激酶-26.73的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与硫氨焦磷酸激酶-26.73异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少38％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中105-836位的序列；和(b)具有SEQ ID NO：1中1-2477位的序列。