[发明专利]一种多肽——人核蛋白20.24和编码这种多肽的多核苷酸无效

专利信息
申请号: 01105754.8 申请日: 2001-03-22
公开(公告)号: CN1376701A 公开(公告)日: 2002-10-30
发明(设计)人: 毛裕民;谢毅 申请(专利权)人: 上海博德基因开发有限公司
主分类号: C07K14/47 分类号: C07K14/47;C07K16/18;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/63;C12N15/64;C07H21/00;C12P21/02;G01N33/68;C12Q1/68;A61K38/17;A61K31/7088;A61P35/00;A61P7/00;A61P31/18;A61P31/00;A61P37/02
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地址: 200092 上海市*** 国省代码: 上海;31
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摘要:
搜索关键词: 一种 多肽 核蛋白 20.24 编码 这种 多核苷酸
【说明书】:

发明属于生物技术领域,具体地说,本发明描述了一种新的多肽——人核蛋白20.24,以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

人核蛋白在转录,mRNA的加工,复制和染色体组织等许多细胞核事件中起作用。许多核蛋白有复杂的信号来介导通过核孔复合物的主动运输。现在已经鉴定出负责选择性的引入细胞核的主要序列,核定位信号(nuclear localiztionsignals,NLSs),以及其相关的受体,例如Kap蛋白家族。经典的NLS含有一个富含赖氨酸和精氨酸残基的短片段。

运用酵母双杂交系统,我们得到了一种鼠的cDNA(E3-3)。E3-3中含有一个558nt的开放阅读框(ORF1),它由一个连续的Kozak序列中的ATG开始。ORF1编码蛋白的分子量为20683Da,其等电点为7.83。人与鼠的E3-3具有71%的同源性,但他们与数据库中的任何其它蛋白均没有同源性。

E3-3编码一种新的蛋白,它在体内广泛表达。E3-3有多种变体,不同的剪切方式导致了其编码蛋白缩短方式的多样性。睾丸是所有组织中唯一能够优先表达最长蛋白变体的,其蛋白为20.6KD,将这一20.6KD变体用增强的绿色荧光蛋白标记,结果显示此蛋白位于核仁内。20.6KD变体是睾丸核仁中的主要蛋白,这表明E3-3可能在睾丸的细胞核仁中占有重要地位。(Max-Planck Institute forPsychiatry,et.al,Biochim Biophys Acta,1997 Sep 12;1353(3):224-30)

本发明的人的基因与鼠核蛋白基因E3-3在蛋白水平上有78%的同一性和86%的相似性。基于以上各点,故认为本发明的新基因为人核蛋白基因,命名为{人核蛋白20.24}。并以此推断其与鼠核蛋白基因E3-3相似,同为核蛋白家族的成员,并具有相似的生物学功能。

由于如上所述人核蛋白20.24蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用,而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白,因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人核蛋白20.24蛋白,特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人核蛋白20.24蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础,因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人核蛋白20.24以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人核蛋白20.24的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人核蛋白20.24的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人核蛋白20.24的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人核蛋白20.24的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人核蛋白20.24的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人核蛋白20.24异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽,该多肽是人源的,它包含:具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地,该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸,它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体:

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸;

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸;

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少79%相同性的多核苷酸。

更佳地,该多核苷酸的序列是选自下组的一种:(a)具有SEQ ID NO:1中497-1051位的序列;和(b)具有SEQ ID NO:1中1-1284位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体,特别是表达载体;一种用该载体遗传工程化的宿主细胞,包括转化、转导或转染的宿主细胞;一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。

本发明还涉及一种能与本发明多肽特异性结合的抗体。

本发明还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人核蛋白20.24蛋白活性的化合物的方法,其包括利用本发明的多肽。本发明还涉及用该方法获得的化合物。

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