[发明专利]一种多肽——血红蛋白－9.24和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——血红蛋白-9.24，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

蚯蚓血红蛋白是从四种无脊髓动物：海星虫、腕足类动物、环节动物以及曳腮动物中分离得到的氧结合蛋白。它们存在于动脉、体腔液以及肌肉中。蚯蚓血红蛋白以多种低聚形式存在：单体(蚯蚓肌红蛋白)、二聚物、三聚物、四聚物以及八聚物。蚯蚓血红蛋白的活性中心由两个铁原子组成，含有约110-129个氨基酸残基，其中一个铁原子与两个组氨酸残基结合，另一个与三个组氨酸残基结合。这两个铁原子则由一个谷氨酸残基、一个天冬氨酸残基以及一个氧原子相互连接[Sheriff S.，Hendrickson W.A.，Smith J.L.(1987)J.Mol.Biol.197(2)：273-296]。

蚯蚓卵红蛋白是一种来源于水蛭的卵黄蛋白，该蛋白也属于蚯蚓血红蛋白家族。在水蛭吸食血液之后，蚯蚓卵红蛋白在自由铁离子的解毒过程中起作用。

在不同来源的血红蛋白序列中均含有一段保守的一致性序列片段，位于该蛋白的C-末端区域，且含有两个铁离子的配位体，一个组氨酸以及一个天冬氨酸：该一致性序列片段如下所示：W-L-x-[NQ]-H-I-x(3)-D-F其中组氨酸和天冬氨酸即为铁离子的配位体。该位点的突变将导致蛋白活性的丧失，从而影响该蛋白在生物体内生物活性的发挥。

由于如上所述血红蛋白-9.24蛋白在机体内重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的血红蛋白-9.24蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新血红蛋白-9.24蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——血红蛋白-9.24以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码血红蛋白-9.24的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码血红蛋白-9.24的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产血红蛋白-9.24的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——血红蛋白-9.24的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——血红蛋白-9.24的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与血红蛋白-9.24异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中977-1231位的序列；和(b)具有SEQ ID NO：1中1-1562位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。

本发明还涉及一种能与本发明多肽特异性结合的抗体。

本发明还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制血红蛋白-9.24蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本发明的多肽。本发明还涉及用该方法获得的化合物。

本发明还涉及一种体外检测与血红蛋白-9.24蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本发明多肽的量或生物活性。

本发明也涉及一种药物组合物，它含有本发明多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。

本发明还涉及本发明的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于血红蛋白-9.24表达异常所引起疾病的药物的用途。

本发明的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。