[发明专利]一种多肽——阴离子交换蛋白－10.89和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——阴离子交换蛋白-10.89，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

阴离子交换是一种影响细胞PH值和细胞容量的细胞内运输功能。阴离子交换蛋白是一个功能相关的蛋白所组成的蛋白质家族，该蛋白质家族具有上述阴离子交换功能，并主要维持细胞内两种主要阴离子的水平：氯离子和碳酸氢根离子。

目前，最具代表性的阴离子交换蛋白是带3蛋白，它是红细胞阴离子膜糖蛋白。带3蛋白大约有900个氨基酸，其中有一个大约400个氨基酸的细胞质N端结构域和一个包含至少10个转膜区域的大约400个氨基酸的疏水C端。带3蛋白的细胞质结构域为细胞骨架蛋白提供结合位点，而完整的膜结构域则负责阴离子的运输。

带3蛋白是细胞胞类细胞所特异的，现在至少有两种在结构和功能上都类似于带3蛋白的蛋白质发现于非细胞胞类组织中。这两种蛋白是AE2和AE3。AE2和AE3在结构上非常类似于带3蛋白，主要不同之处是其N末端结构域的延伸出的300个氨基酸残基。

我们在此主要提出两个特征模式。第一个特征模式是一个包含四个成束带正电荷的保守序列，该保守序列位于细胞质结构域的C末端，正好在第一个完整结构域的转膜片段之前。第二个特征模式是第五个转膜片段的非常保守序列，这个保守序列包括一个赖氨酸，该赖氨酸是DIDS的共价结合位点，DIDS是阴离子交换蛋白的一种抑制剂。

这两个特征模式分别是；[1] F-G-G-[LIVM](2)-[KR]-D-[LIVM]-[RK]-R-R-Y[2]   [FI]-L-I-S-L-I-F-I-Y-E-T-F-x-K-L。

阴离子交换蛋白使红细胞能作为呼吸作用产生的碳酸氢盐载体，使二氧化碳以碳酸氢盐地形式从各种组织运至肺。此外，在红细胞进行气体运输时，阴离子交换蛋白可以调节后毛细血管的PH值。

由于如上所述阴离子交换蛋白-10.89蛋白在机体内重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的阴离子交换蛋白-10.89蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新阴离子交换蛋白-10.89蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——阴离子交换蛋白-10.89以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码阴离子交换蛋白-10.89的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码阴离子交换蛋白-10.89的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产阴离子交换蛋白-10.89的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——阴离子交换蛋白-10.89的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——阴离子交换蛋白-10.89的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与阴离子交换蛋白-10.89异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中133-432位的序列；和(b)具有SEQ ID NO：1中1-830位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。

本发明还涉及一种能与本发明多肽特异性结合的抗体。