[发明专利]一种多肽——亚硝酸/亚硫酸还原酶－9.57和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——亚硝酸/亚硫酸还原酶-9.57，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

在硝酸盐的同化作用中，其中的一个过程就是，亚硝酸还原酶(Nitritereductases NiR)催化硝酸盐转化成铵。亚硝酸还原酶有两种类型：一种是在高等植物中的叶绿体形式的亚硝酸还原酶(EC 1.7.7.1)，它是一种单体蛋白，利用铁氧化还原蛋白提供电子。另一种是真菌和细菌中的亚硝酸还原酶(EC 1.6.6.4)，这是同源异体蛋白，是利用NAD(P)H提供电子的。这两种形式的亚硝酸还原酶都具有血红素-铁和铁-硫的结合中心位点。

而亚硫酸还原酶(Sulfite reductase SiR)(NADPH)(EC 1.8.1.2)在细菌中，催化亚硫酸盐转化成硫化物，它也是一种单体蛋白。这种亚硫酸还原酶上的一个亚基具有α和β两种类型。α型亚硫还原酶就是黄素蛋白，而β型的就是血红素，铁-硫蛋白。

亚硫酸还原酶(铁氧化还原蛋白)(EC 1.8.7.1)是一类存在于蓝藻类细菌和植物中的单体蛋白，它也可以催化亚硫酸盐转化成硫化物。

厌氧型的亚硫酸还原酶(EC1.8.1.-)也是存在在细菌中的，它可以将NADH依赖性的亚硫酸物催化转化成硫化物，它是一个含有3个亚基的多亚基酶，，而C型能就是血红素，铁-硫蛋白。

以上的这些酶都具有一些共同的特征，在它们的C端具有相似的序列，这个序列大概有80个氨基酸左右，包括4个半胱氨酸的残基，在亚硫酸还原酶中，发现这个区域是在第一和第三个开放阅读框中，(Cys-X-X-Cys-X-X-Cys-X-X-X-Cys-Pro)。其中两个连接在一起，位于这个序列的前端，而另外的两个是在这个序列区域的中间。这些半胱氨酸与铁-硫结合位点有关，其中最后一个与血红色素的结合相关。(Journal of Bacteriology 1991 Feb；173(4)：1544-53)

我们发现大致在第二个半胱氨酸左右的区域上有一个保守区域，[STV]-G-C-x(3)-C-x(6)-[DE]-[LIVMF]-[GAT]-[LIVMF]，其中的两个C是铁-硫配基。

本发明的多肽含有上述亚硝酸/亚硫酸还原酶的特征功能域，并且具有与亚硝酸/亚硫酸还原酶相似的生物学功能，因而被认为是一种亚硝酸/亚硫酸还原酶，参与了与血红色素、铁-硫的结合。若表达异常，则会影响生物体的一系列代谢活动，引起生理功能紊乱，导致各种疾病的发生。

由于如上所述亚硝酸/亚硫酸还原酶-9.57蛋白在机体内重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的亚硝酸/亚硫酸还原酶-9.57蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新亚硝酸/亚硫酸还原酶-9.57蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——亚硝酸/亚硫酸还原酶-9.57以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码亚硝酸/亚硫酸还原酶-9.57的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码亚硝酸/亚硫酸还原酶-9.57的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产亚硝酸/亚硫酸还原酶-9.57的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——亚硝酸/亚硫酸还原酶-9.57的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——亚硝酸/亚硫酸还原酶-9.57的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与亚硝酸/亚硫酸还原酶-9.57异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。