[发明专利]细胞学组合检测及操作方法

说明书

本发明属细胞学检测技术，具体地说是细胞学多项指标的组合检测技术及相应的操作方法。

在细胞免疫学、细胞遗传学、细胞增殖动力学的研究中，淋巴细胞转化率(LTR)、微核率(MNR)、姊妹染色单体互换频率(SCE)、有丝分裂指数(MI)、细胞周期比率(CCR)、增殖率指数(PRI)是常用和首选的指标。目前国内外多数实验室测定这6项指标，采用的是采一次血来培养72小时后，收集细胞制片，观测一项指标，要观测另一项指标得再采一次血来培养72小时后，收集细胞制片观测。这种单项实验单项测定方法，仪器复杂、操作繁琐、费时耗资，用单项实验单项测定6项指标要耗资一千多元，需连续工作35天才能获得全部结果。单项测定法，测定结果只能反映某一方面的问题，不利于综合分析评价。因此，国内外均有人试图探索简便易行的方法。1986年Kunihiko等在研究温度对化学物质诱发人体淋巴细胞SCE的影响时，把SCE和CCR组合观测，1988年顾祖维等在16种化学物体外微核检测中把SCE与MNR同时观测，提高了检测效率和可靠性，但未见三项以上指标组合检测的报道。经国际联机检索国内外科技文献和国内外专利文献均未见与本发明相同技术报道。

本发明的目的：鉴于传统的细胞学检测方法存在仪器复杂、操作繁琐、费时耗资等缺点，建立快速、简便，省力节资的组合检测法就显得势在必行。为此，我们发明了细胞学组合检测及相应的操作方法。

主要技术内容

一、细胞学组合检测

随着当代生物科学的发展，细胞检测技术已成了推动细胞生物学、基础医学、临床医学、预防医学进步和发展的有力武器。细胞生物学和医药卫生科研及实际应用都离不开细胞学检测技术，例如：我们可通过测定LTR来了解细胞的免疫功能；测定MNR和SCE来了解染色体和DNA的损伤程度；测定MI、CCR和PRI来判断细胞的分裂和增殖活力。科学技术的不断进步和边缘学科的兴起，使细胞学检测技术在医药卫生及有关部门的应用日益广泛，研究和应用好新方法是科技人员的当务之急。

为此，我们在细胞学单项实验单项检测法基础上，发明了细胞学组合检测法，它的特征是：在观测姊妹染色单体互换频率(SCE)的玻片上同时观测淋巴细胞转化率(LTR)、微核率(MNR)、有丝分裂指数(MI)、细胞周期比率(CCR)和增殖率指数(PRI)6项指标的细胞学组合检测。

研究细胞学组合检测法要考虑的主要问题是试剂和操作方法对实验结果的影响，用组合方法与传统法检测LTR、MNR、MI的差别在于：主要是前者在细胞培养液中加入了胸腺嘧啶核苷的类似物5-溴脱氧尿嘧碇核苷和纺锤体抑制剂秋水仙碱，其次是前者用UPG分化染色，这些因素对检测结果是否有影响？我们作了30例自身对比研究。用组合法测定的LTR为67.30±12.27％，MNR为1.07±0.77‰，MI为4.93±1.34％；用传统法测定的LTR为68.77±10.01％，MNR为1.20±0.65‰，MI为2.25±1.85％。经统计学处理，LTR和MNR均无显著性差异(P＞0.05)，MI有显著性差异(P＜0.001)，表明可用组合法代替传统法来测定LTR和MNR，而测定MI最好是用组合法。加之测定CCR和PRI一直是和SCE的方法相同。所以，组合法是测定LTR、MNR、SCE、MI、CCR、PRI的可靠方法。

根据优选组合细胞免疫学、细胞遗传学和细胞增殖动力学等边缘交叉学科里常用和首选的观测指标而建立的细胞学组合检测及操作方法，在同一张玻片上，同时观测人体淋巴细胞转化率(LTR)、微核率(MNR)、姊妹染色单体互换频率(SCE)，有丝分裂指数(MI)、细胞周期比率(CCR)、增殖率指数(PRI)6项指标，具有灵敏、简便、快速、经济、准确可靠，一次同时测试多个终点，各项指标之间优势互补，有利于综合评价的优点。6项检测指标，也可视使用目的单项或多项组合应用，在细胞生物学、基础医学、临床医学、预防医学等学科领域里应用。

二、操作方法

在单项实验，单项检测的操作方法的基础上，我们发明了细胞学组合检测的操作方法，其特征是：进行组合检测时在观测姊妹染色单体互换频率等操作中，配制培养液时加入了自制小牛血清和自制植物血凝集素，该自制小牛血清是抽取初生牛犊全血分离其血清而成，该自制植物血凝集素是从大白芸豆中提取而成。进行细胞培养时加入5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)25μg，收获前6小时加入秋水仙碱0.3μg。分化染色采用30W紫外灯距离8cm垂直照射25分钟，4％Giemsa37℃染色7分钟。