[发明专利]从孕马尿液中制备结合雌激素的方法

说明书

本发明涉及从孕马尿液(PMU)中制备结合雌激素的方法。

结合雌激素是治疗更年期综合征的有效药物。人们发现来自诸如孕马尿液(PMU)的天然来源的结合雌激素对治疗更年期综合征特别有效。

从PMU中用极性有机溶剂提取可获得含结合雌激素的提取物。然而，这种液-液提取法有很多问题，如起泡，沉淀，乳化和相分离不佳。因此，研发了一种固-液提取法，以便从PMU中提取结合雌激素。

H.L.Bradlow等，类固醇，11(1968)，第265-272页，公开了Amberlite XAD-2(一种苯乙烯-二乙烯苯共聚物，由Rohm&Haas提供)，它被建议用于从尿液中提取结合雌激素。然而，所得的吸附能力较低。通过使用Bradlow的方法，提取物中的混合残余物通常含有10％或更低的尿液固体。

1973年10月30日公告的Thompson L.美国专利3,769,401提出使用Dowex 1-X2-C1以从尿液中提取结合雌激素，Dowex 1-X2-C1是一种含有季铵官能团的强碱性阴离子交换树脂，该季铵官能团附着到苯乙烯二乙烯苯共聚物上。

1965年Hahnel，R.，Anal Biochem以及1969年Hobkrik，R.，Musey，PI.和Nilsen，M.，类固醇中，发现DEAE-Sephadex(二乙基氨基乙基，DEAESephadex)可用于分离结合雌激素。然而，结果表明为了洗脱雌激素结合物必需有盐梯度。P.I.Musey等，1997年5月，类固醇Vol.29，No.5，第657-668页创造了一种分离雌激素结合物的等浓度法(isocraticmethod)，取代以前的色谱分离法，以便不使用梯度体系便可获得更高程度的分离度。DEAE-Sephadex可购自Pharmacial Piscataway。

1998年3月3日公告的Ivan Ban等的美国专利5,723,454，公开了一种方法，即通过混合物的固相提取，在非-离子半-极性聚合吸附剂树脂上，从孕马尿液中获得含结合雌激素天然混合物的提取物的方法。该法包括的步骤有：用微量过滤法过滤PMU，接触Amberlite XAD-7^TM，用NaOH清洗至pH为12.5-13.5，然后用EtOH∶水(30∶70)的溶液洗脱至pH约为12。美国专利5,723,454使用Amberlite XAD-7^TM作为一种半-极性聚合吸附剂树脂，这是一种由Rohm和Haas制造的大孔交联脂族聚羧酸酯。

1998年9月29日公告的Ivan Ban等的美国专利5,814,624公开了一种方法，即在反相(reverse-phase)(RP)硅胶上，通过混合物的固相提取，从孕马尿液中获得含结合雌激素天然混合物提取物的方法。该方法包括复杂的步骤：用沙床或微量过滤法过滤PMU，用NaOH调节PH值到大约13，然后用HCl调节PH到大约8-8.5，接触RP硅胶，用醋酸/醋酸钠缓冲液清洗，再用EtOH-水混合液清洗。美国专利5,814,624举例说明了由Merck制造的作为RP硅胶的硅胶60/二甲基硅烷衍生物。

尽管已研发的固相提取法克服了由液-液提取法带来的大部分弊端，但仍存在一些问题。例如，这种方法耗时；所用的树脂贮存期限有限并且成本高；对于大规模的生产，经吸附剂树脂处理的原材料的粘度太高；结合雌激素的总回收率较低，一般来讲，低于80％。

因此，本领域中需要有更有效高产的方法，从孕马尿液中回收雌激素。

本发明提供了从孕马尿液(PMU)中制备结合雌激素的方法，该方法使结合雌激素的回收率非常高，同时避免了常规使用的液-液和固-液提取法所产生的弊端。

通过从孕马尿液(PMU)中制备结合雌激素的方法可达到本发明的目，该方法包括以下步骤：(a)用碱性溶剂处理PMU物质；(b)过滤经处理的PMU物质以去除粘液物质及固体；(c)将经过滤的PMU产物与足量的聚苯乙烯吸收剂树脂接触；和(d)用水混溶性溶剂洗脱树脂以分离结合雌激素和树脂，然后获得结合雌激素的粗提取物。

本发明提供了从孕马尿液(PMU)中制备结合雌激素的方法，该方法包括以下步骤：(a)用碱性溶剂处理PMU物质；(b)过滤经处理的PMU物质以去除粘液物质和固体；(c)使经过滤的PMU产物与足量的聚苯乙烯吸收剂树脂接触；和(d)用水混溶性溶剂洗脱树脂以分离结合雌激素和树脂，然后获得结合雌激素的粗提取物。