[发明专利]3,4－二羟基肉桂酸钠在制备抗肿瘤药物中的新用途

说明书

本发明涉及将3,4-二羟基肉桂酸改造成其钠盐后作为治疗肿瘤药物的新用途。

恶性肿瘤严重威胁人类健康和生命。目前临床应用的化疗药物毒性较大，对实体瘤效果较差，接受化疗的病人绝大多数最终都死于肿瘤细胞转移。因此，寻找低毒性而能抑制肿瘤生长和转移的药物是肿瘤化疗研究的重要任务。本发明涉及的已知结构化合物3,4-二羟基肉桂酸(又名咖啡酸)广泛分布于多种蔬菜、水果和植物中。文献报道3,4-二羟基肉桂酸是一种具有选择性的耐药肿瘤细胞MCF-7/Dox的化学增敏剂[Anticancer Res,1997,17:1913-1917]，对肿瘤细胞的侵袭具有抑制作用[Biol Pharm Bull,1997,20:345-348]。但是3,4-二羟基肉桂酸溶解性差，而其钠盐显示出良好的水溶性。迄今未见关于3,4-二羟基肉桂酸钠在动物体内试验的抗肿瘤作用的报道。

本发明涉及的化合物3,4-二羟基肉桂酸钠，其动物实验毒性很小，具有抑制肿瘤细胞分泌明胶酶的作用，抑制肿瘤的生长和转移，能协同增强化疗药物的抗肿瘤作用。

本发明目的是将3,4-二羟基肉桂酸改造成其钠盐，以期取得较好的效果。

本发明内容和要点是：

1)制备3,4-二羟基肉桂酸钠：将18克3,4-二羟基肉桂酸溶于200ml水中，缓缓加入碳酸钠水溶液(5.3g/20ml)，再用20ml水洗涤后一起并入，室温搅拌2小时，过滤，冷干，得到3,4-二羟基肉桂酸钠制品，其结构如下式所示：

式中R=H时为3,4-二羟基肉桂酸

R=Na时为水溶性好的3,4-二羟基肉桂酸钠盐

2)利用蓝四唑法，检测3,4-二羟基肉桂酸钠对体外培养的人肿瘤细胞增殖的抑制作用。将细胞与药物共同培养72小时，加入蓝四唑试剂，反应4小时，除去培养基，加入二甲基亚砜，然后在540nm处测定吸光度以判断药物活性。结果表明，3,4-二羟基肉桂酸钠对人肿瘤细胞的半数抑制浓度(IC₅₀)为150-250μg/ml(表1)。

表1 3,4-二羟基肉桂酸钠对人肿瘤细胞的增殖抑制作用

细胞株          IC₅₀(μg/ml)人白血病细胞HL-60    242人口腔鳞状癌细胞KB   157

3)3,4-二羟基肉桂酸钠对肿瘤细胞分泌明胶酶的抑制作用。取对数生长期的HT-1080细胞，培养24h后弃去培养上清，换无血清RPMI-1640培养基，同时加3,4-二羟基肉桂酸钠及对照溶媒，继续培养24h后收集无血清培养上清，与加样缓冲液混匀上样，进行SDS-PAGE电泳。电泳完毕后，以蒸馏水漂洗凝胶数次后，移入2.5％Triton-100溶液中，低速摇动以洗脱SDS，用蒸馏水漂洗后，加入明胶酶缓冲液在37℃恒温摇床中温育，再次用蒸馏水漂洗，放入0.1％考马斯亮蓝染色液染色，后在脱色液中脱色，至对照出现明显清晰的负染条带。根据负染条带的宽度和亮度反映明胶酶的活性，对负染条带扫描以对药物作用进行半定量分析，结果表明3,4-二羟基肉桂酸钠能抑制HT-1080分泌72kDa和92kDa两种明胶酶。

表3 3,4-二羟基肉桂酸钠对HT-1080细胞分泌明胶酶的抑制作用