[发明专利]一种多肽——人亚铁血红素铜离子呼吸氧化酶亚基1－17.27和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人亚铁血红素铜离子呼吸氧化酶亚基1-17.27，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

亚铁血红素铜离子呼吸氧化酶是一些寡聚整膜蛋白复合物，它们催化呼吸链的最后一步反应，将电子从细胞色素C或对苯二酚中转移至氧中。一些终端氧化酶可以在原核生物的原生质膜或真核生物的先例体内膜两侧形成一个穿膜质子浓度梯度。

在此酶复合物中，原核生物有3-4个亚基，而哺乳动物则含有13个聚多肽，其中只有催化亚基(相当于与哺乳动物亚基1-CO I)在所有的亚铁血红素铜离子呼吸氧化酶中都存在。在酶复合物中存在一个由高旋转的亚铁血红素和铜离子B构成的二金属中心，它与一个低旋转血红素捆绑在一起，和四个包含CO I的跨膜区域外侧的六个组氨酸残基相结合，这在亚铁血红素铜离子呼吸氧化酶家族中是普遍存在的。

与真核生物相比，原核生物的呼吸链中含有多种终端氧化酶，这些酶复合物在亚铁血红素与铜离子结合，底物类型和底物亲和力等方面存在差异。为适应不同的呼吸氧化酶，细胞在不同的环境下生存。

最近，我们发现一种含有亚铁血红素铜离子呼吸氧化酶亚基1，铜离子B结合结构域的蛋白，其结构域为：[YWG]-[LIVFYWTA](2)-[VGS]-H-[LNP]-x-V-x(44，47)-H-H，其中三个H是铜离子B的配位基。这一序列在此家族的所有成员中均存在，它是亚铁血红素铜离子呼吸氧化酶与铜离子结合，形成正常的空间结构，发挥正常生物学功能的中心片段。该蛋白的表达异常将导致生物体呼吸链反应的异常，从而引发各种与之相关的线粒体疾病、各种与能量代谢及物质代谢相关的疾病等。

由于如上所述人亚铁血红素铜离子呼吸氧化酶亚基1-17.27蛋白在机体内重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人亚铁血红素铜离子呼吸氧化酶亚基1-17.27蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人亚铁血红素铜离子呼吸氧化酶亚基1-17.27蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人亚铁血红素铜离子呼吸氧化酶亚基1-17.27以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人亚铁血红素铜离子呼吸氧化酶亚基1-17.27的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人亚铁血红素铜离子呼吸氧化酶亚基1-17.27的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人亚铁血红素铜离子呼吸氧化酶亚基1-17.27的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人亚铁血红素铜离子呼吸氧化酶亚基1-17.27的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人亚铁血红素铜离子呼吸氧化酶亚基1-17.27的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人亚铁血红素铜离子呼吸氧化酶亚基1-17.27异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中208-681位的序列；和(b)具有SEQ ID NO：1中1-2234位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。

本发明还涉及一种能与本发明多肽特异性结合的抗体。