[发明专利]一种多肽——人磷酸合成酶－11.55和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人磷酸合成酶-11.55，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

在细菌，植物和真菌中，EPSP合成酶(3-phosphoshikimate 1-carboxyvinyltransferase)，催化从芳族氨基酸(莽草酸途径)的分支酸开始的生物合成的第六步。在非寻常羟基转移反应中，EPSP合成酶催化从PEP和莽草酸3-磷酸(S3P)到EPSP和磷酸(Pi)。EPSP合成酶是除草剂有效成分甘草磷的靶蛋白，甘草磷可以抑制EPSP合成酶的活性。甘草磷是一个与EPSP合成酶中的PEP相竞争的抑制剂，它与E·S3P相作用。在所有的PEP依赖性的反应中，EPSP合成酶是唯一一个可以被甘草磷抑制的酶。从而表明，EPSP合成酶中的PEP结合位点是独一无二的。事实上，EPSP合成酶并不是以游离酶的形式与甘草磷相作用，而是以酶-底物复合物E.S3P的形式，这也是独一无二的。(Stephen R.Padgette，et.al，The Journal Of BiologicalChemistry，266，33：22364-22369，1991)

对不同来源的EPSP合成酶序列的研究显示，此酶在进化过程中高度保守。我们在一个新的蛋白中找到了两个EPSP合成酶保守功能域，第一个功能域为[LIVM]-x(2)-[GN]-N-[SA]-G-T-[STA]-x-R-x-[LIVMY]-x-[GSTA]，它是酶活性位点的一部分，对于抵抗甘草磷的作用也相当重要。第二个功能域为[KR]-x-[KH]-E-[CST]-[DNE]-R-[LIVM]-x-[STA]-[LIVMC]-x(2)-[EN]-[LJIVMF]-x-[KRA]-[LIVMF]-G，它位于蛋白的C端部分，其中含有一个保守的赖氨酸，它与酶的活性有关。

由于如上所述人磷酸合成酶-11.55蛋白在机体内重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人磷酸合成酶-11.55蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人磷酸合成酶-11.55蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人磷酸合成酶-11.55以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人磷酸合成酶-11.55的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人磷酸合成酶-11.55的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人磷酸合成酶-11.55的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人磷酸合成酶-11.55的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人磷酸合成酶-11.55的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人磷酸合成酶-11.55异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中734-1051位的序列；和(b)具有SEQ ID NO：1中1-1885位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。

本发明还涉及一种能与本发明多肽特异性结合的抗体。

本发明还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人磷酸合成酶-11.55蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本发明的多肽。本发明还涉及用该方法获得的化合物。