[发明专利]一种多肽——人羧酸酯酶－24.64和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人羧酸酯酶-24.64，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

羧酸酯酶是能水解药物及毒素的酯群并且在机体中起着重要的新陈代谢及解毒的作用。在人类机体中，存在于血清及肝脏组织中的可卡因和吗啡能代谢为酯化的代谢产物并从尿液中分泌出来。有两种不同的人类肝脏的羧酸酯酶(hCE-1和hCE-2)具有水解可卡因的功能。hCE-1能催化可卡因的甲基酯的水解产生苯酰芽子碱和甲醇并且用酒精处理使其具有乙基转酯作用。肝脏hCE-2和血清胆碱酯酶能催化可卡因的苯酰酯的水解并产生甲基酯化的芽子碱和安息香酸。吗啡的代谢能通过羧酸酯酶hCE-1、hCE-2以及血清胆碱酯酶来进行。

人类肝脏的hCE-1、hCE-2酶属于具有一个60kDa亚基的羧酸酯酶家族，并且对于酯水解表现出很大的底物特性。这些酶能够从不同的哺乳动物不同组织的微粒以及胞质亚细胞片段中纯化出来。

hCE-2是一个新的人类肝脏羧酸酯酶，从cDNA诱导出的hCE-2具有高度保守的氨基酸序列，它包含两对Cys残基在位点69、97，位点254、265是参与分子内二硫键的形成的位点。由于契合序列表明酯酶具有α、β水解酶的重叠，所以在序列Gly-Glu-Ser-Ala-Gly-Gly中的活性位点Ser²⁰²序列Ala-Asp-His-Gly-Asp-Glu中的接触反应位点His⁴³¹是酯酶接触反应三联体的两个成分。酯酶活性也依赖于接触反应三联体的第三个成分：氨基酸的酸性成分。

此外这个新的人类肝脏的羧酸酯酶hCE-2的保守序列有两个微粒靶序列：位于N-末端的一个狂犬病17-残基信号多肽对于内质的网状结构具有靶向性；另一个是位于C末端的保守的4-氨基酸序列HTEL，它可能具有固定内质网状结构蛋白质的功能。序列对比表明hCE-2位于内质网状结构中。

本发明的人的基因与人编码的羧酸酯酶hCE-2基因在蛋白水平上有43％的同一性和62％的相似性。故认为本发明的新蛋白为一种新的人的羧酸酯酶，命名为，并以此推断其与人的羧酸酯酶hCE-2相似，同为羧酸酯酶家族的成员，并具有相似的生物学功能。

由于如上所述人羧酸酯酶-24.64蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人羧酸酯酶-24.64蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人羧酸酯酶-24.64蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人羧酸酯酶-24.64以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人羧酸酯酶-24.64的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人羧酸酯酶-24.64的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人羧酸酯酶-24.64的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人羧酸酯酶-24.64的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人羧酸酯酶-24.64的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人羧酸酯酶-24.64异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中236-910位的序列；和(b)具有SEQ ID NO：1中1-1244位的序列。