[发明专利]一种多肽——人锌指蛋白－36.08和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人锌指蛋白-36.08，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

本发明公开了一种新的多肽——人锌指蛋白-36.08，编码此多肽的多核苷酸和经DNA重组技术产生这种多肽的方法。本发明还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如胚胎发育畸形、肿瘤、糖尿病、月经失调、消化性溃疡、心律失常、贫血、癫痫等。本发明还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明还公开了编码这种新的人锌指蛋白-36.08的多核苷酸的用途。

真核基因的转录调控对于基因的正常表达及发挥生物学功能是十分重要的，通常由转录调控因子来完成这一过程。转录调控因子在生物体内参与决定基因在何种组织及何种发育阶段开始转录，编码这类蛋白的基因如发生突变，不但该基因自身不能正常表达，而且受其调节的许多基因也不能正常的进行转录与表达。转录因子对基因表达的调控主要通过转录因子与特定的DNA序列结合、转录因子间的相互作用及转录因子与常规转录机构的相互作用在完成。根据结构基序的不同，已知的DNA结合蛋白可分为两类：含有螺旋-转角-螺旋基序的蛋白及锌指蛋白[Kamal Chowdhury，Heidi Rohdewohld et al.，Nucleic AcidsResearch，1988，16：9995-10011]。

锌指蛋白为编码锌离子介导的核苷酸结合蛋白多基因家族中的成员，锌指蛋白按其结构特征又可分为各种不同的家族。人们已从酵母、果蝇、鼠及人等多种生物体中分离得到了各种锌指蛋白。研究发现，锌指蛋白中的大多数成员为生物体内基因表达的转录调控因子，与基因的转录活化及抑制有关，这些蛋白的表达异常将引发各种发育紊乱性疾病、各种肿瘤的发生、各种遗传性疾病及免疫系统疾病。

所有的锌指蛋白Kruppel家族的成员均含有28-30个氨基酸长的保守的指重复序列(F/Y)XCXXCXXXFXXXXXLXXHXXXHTGEKP，其中两个半胱氨酸与两个组氨酸残基的位点是高度保守的。指结构间的转角则将一个个指结构连接在一起形成了完整的锌指结构。指结构在很多不同的锌指蛋白中均含有多个拷贝，其拷贝数不同则功能也不同[Kamal Chowdhury，Heidi Rohdewohld et al.，Nucleic AcidsResearch，1988，16：9995-10011]。锌指蛋白与不同长度的DNA的结合依赖于指结构的数量，多指结构可能与复合物的结合稳定性有关，而复合物是RNA聚合酶转录的作用位点。研究发现，许多锌指蛋白的锌指结构域相互连接区域也是高度保守的，这一区域通常含有下列序列：His-Thr-Gly-Gly-Lys-Pro-(Tyr，Phe)-X-Cys，其中组氨酸与半胱氨酸为金属离子的结合位点，而X为可变氨基酸残基。这一区域对于锌指结构的形成是必需的，指结构的数量将直接影响锌指蛋白与不同长度的DNA结合，且多指结构与复合物的结合稳定性有关[Jeremy M.Berg，Annu.Rev.Biophys.Chem，1990，19：405-421]。

本发明的人的基因与鼠锌指蛋白家族的成员ZFP28在蛋白水平上有46％的同一性和64％的相似性。且两者氨基酸序列中均含有锌指蛋白家族的特征性序列---锌指蛋白指重复性序列片段及指连接区域高度保守的片段。基于以上各点，故认为本发明的新基因为一人锌指蛋白家族的新成员，命名为人锌指蛋白-36.08。并以此推断其与鼠ZFP28蛋白相似，同为锌指蛋白家族的成员，并具有相似的生物学功能。

由于如上所述人锌指蛋白-36.08蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人锌指蛋白-36.08蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人锌指蛋白-36.08蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人锌指蛋白-36.08以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人锌指蛋白-36.08的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人锌指蛋白-36.08的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人锌指蛋白-36.08的方法。