[发明专利]一种枯草芽孢杆菌变异菌株的批量培养方法

说明书

本发明涉及一种枯草芽孢杆菌变异菌株(Bucillus Subrilis sp.)的批量培养方法，确切说，涉及一种枯草芽孢杆菌变异菌株1^#、2^#、3^#和4^#的批量培养方法，属微生物菌体培养技术领域。

水产养殖池的池水主要受到二种污染：大量人类生活污水，如人畜粪尿、洗涤水等排入河、湖，使河、湖水中含有大量氨氮和硝基氮，上述池水汲自河、湖，该池水中也含有大量氨氮和硝基氮；上述池水还受到残存饲料和水产品排泄物的污染，污染物所含的大分子有机化合物造成水体的富营养化和有毒藻类及细菌大量繁殖。上述二种污染导致水产品，如鱼、虾、蟹生病死亡。四株枯草芽孢杆菌变异菌株：枯草芽孢杆菌变异菌株1^#、2^#、3^#和4^#既能分解转化池水中的氨氮和硝基氮，又能分解池水中的残存饲料和水产品排泄物所含的大分子有机化合物，适于用来制备复合型活菌生物净水剂。为实现该净水剂的工业化生产，需有获得大量上述变异菌株菌体的方法。背景技术中有一种液体发酵法，可用来批量培养上述变异菌株：先用蛋白胨、酵母膏、牛肉膏、葡萄糖和无机盐等配制液体培养基；然后把上述四株变异菌株的细菌种子分别接入四个盛有上述液体培养基的发酵罐中；最后通过液体发酵，批量培养，获得大量活菌体：枯草芽孢杆菌变异菌株1^#、2^#、3^#和4^#。1吨的发酵罐可装700Kg的液体培养基，能得到7～8Kg的湿菌体，以每克湿菌体含活菌数100亿个计，获得的活菌数仅为700000亿～800000亿个。背景技术虽能批量培养活菌体，但有成本高昂、获得的活菌数少和不易推广使用的缺点。

本发明的目的是提出一种成本低廉、获得的活菌数多和易于推广使用的枯草芽孢杆菌变异菌株的批量培养方法。

该目的通过采用以下技术方案得以实现：一种枯草芽孢杆菌变异菌株的培养方法，其特征在于，操作步骤：

第1步  配制液体培养基，为四个1吨的发酵罐配制液体培养基，向每罐投入原料700Kg，该原料配方为黄豆并粉7～56Kg，玉米粉14～49Kg，麸皮3.5～35Kg，工业级硫酸铵2.8～4.9Kg，工业级氯化铵0.7～2.1Kg，水553～672Kg，混和搅拌均匀，制成相同的液体培养基四罐；

第2步  灭菌，在压力为1.1～1.4Kg/cm²的的条件下，对罐内的液体培养基进行高压灭菌处理，处理时间为30～40分钟；

第3步  菌体培养，待罐内的液体培养基冷却到30～50℃时，按5～10∶95～90的重量比率把预先经二级培养成的处于对数生长期的枯草芽孢杆菌变异菌株1^#、2^#、3^#和4^#的细菌种子分别接入上述的四个发酵罐，在罐压、通风量、转速和罐温分别为0.4～0.6Kg/cm²、0.5～1.0∶0.6～1.2V/V、200～300rpm和20～50℃的条件下，连续培养20～72小时；

第4步  获得活菌，经上步发酵的液体培养液，用转速为3000～10000rpm的离心机离心20～30分钟，从四个发酵罐分别得到60～70Kg的枯草芽孢杆菌变异菌株1^#、2^#、3^#和4^#的湿菌体，以每克湿菌体含活菌20亿～50亿个计，从每罐获得的活菌数为1200000亿～3500000亿个。

与背景技术相比，本发明具有以下优点：

1.成本低廉。因为原料主要是农副产品的下脚或饲料，所用无机盐为工业级，量少价廉。

2.获得的活菌数多。约是背景技术的1.5～5倍。

3.便于推广使用。

本发明特别适于用来批量培养枯草芽孢杆菌变异菌株1^#、2^#、3^#和4^#菌体，为工业化生产复合型活菌生物净水剂提供活菌原料，是一项能促进水产养殖的、能产生巨大经济效益的和便于推广使用的新技术。