[发明专利]一种多肽——信使核糖核酸前体拼接因子－59.84和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——信使核糖核酸前体拼接因子-59.84，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

RNA的拼接是将内含子从mRNA前体剪除，并将外显子连接成为成熟mRNA的过程，这个过程需要拼接酶、反式作用蛋白(如丝氨酸-精氨酸蛋白，即SR)、顺式作用蛋白等一系列酶复合物(Horowitz和Krainer，1994)，通过拼接子有效浓度的调节可改变其拼接。[DNA and Cell Biology，1997，16(6)：679-690]

果蝇tra-2是一RNA结合蛋白，含有一个RNA识别功能域(RRM)和两个SR结构域。tra-2属于SR蛋白家族(Fu，1995)，该家族成员均具有一个富含交替的Ser-Arg残基的结构域，该结构域是拼接酶复合物的必要组成成分，在拼接的早期阶段有重要作用(Krainer et al.，1990)，但该蛋白的SR结构域缺乏其它SR结构域皆有的保守功能域EFEDPRDAED。[DNA and Cell Biology，1997，16(6)：679-690]1997年，BIRGIT BEIL等人分离出一个与果蝇转座子-2(TRA-2)同源的蛋白，命名为人htra2-β蛋白。它是一种核蛋白，和SC35以斑点模式共同定位于细胞核中。该蛋白是SR蛋白家族成员，其基因长21232bp，含10个外显子和9个内含子，定位于3号染色体q区域。其转录起始密码子的上游区域含有许多转录因子结合位点[Genomics 1998，536(2)：191-202]。另一种形式的htra2-β通过选择性拼接而形成，它不具有SR结构域，这种拼接受htra2-β蛋白的活性调节。它们的最长开放阅读框都由288个氨基酸组成，编码一个等电点为9.8、分子量为33.6KD的碱性蛋白，其3′端非编码区富含AU(30.1％A，35.7％U)长为948个核苷酸，含两个AUUUA功能域，并且以多聚腺苷酸信号结尾。该种蛋白具有多个结构域：其一为氨基端的SR结构域，它位于和RNP-1、RNP-2有一致序列的RNA结合功能域结构域之后(Birney et al.，1993)，而含有甘氨酸连接子的RRM结构域位于它之后。该htra2-β基因在人大脑、肾脏、肝脏、脾脏、心脏、肺等组织器官中均有较高水平表达[DNA and Cell Biology，1997，16(6)：679-690]。

htra2-β是人拼接因子，含有两个分离的SR结构域，其中一个SR结构域定位在氨基端或羧基端(Birney et al.，1993；Fu，1995)，氨基端的SR结构域对于大多数tra-2的功能是必不可少的，在细胞外压作用下的蛋白相互作用中有功能。作为一种RNA拼接因子，htra2-β对于RNA前体的剪接具有重要作用，若表达过量，会破坏RNA前体的成熟，影响蛋白质的合成及其功能，导致肿瘤等一系列疾病。此外，其在相关疾病的诊断和治疗也有一定作用。(EMBOJ.，1998，17(7)：2095-2106)

在前体mRNA剪接内含子的两步转酯作用反应可能是被RNA催化的[Madhani，H.D.and Guthrie，C.(1994)Annu.Rev.Genet.，28，1-26]。剪接发生在一个大的核糖核蛋白微粒中，剪接体聚集在许多参与发生在前体mRNA，小核仁核糖核蛋白微粒(snRNPs)和非小核仁核糖核蛋白因子之间的动态反应步骤中。

除了少数几种蛋白，几乎所有哺乳动物的剪接蛋白都参与剪接复合体积聚的早期过程。

本发明的新的多肽与已知的信使核糖核酸前体拼接因子在蛋白水平上具有28％的同源性和51％的相似性，并与之具有相似的结构特征，由此认为其是一种新的信使核糖核酸前体拼接因子，命名为信使核糖核酸前体拼接因子-59.84，并与已知蛋白具有相似的生物学功能。该蛋白在体内参与将内含子从mRNA前体剪除，并将外显子连接成为成熟mRNA的过程，其突变或表达异常将导致相关蛋白表达异常，引起肿瘤等一系列疾病。此外，该蛋白还可用于诊断及治疗上述各种疾病。