[发明专利]诱导细胞凋亡蛋白、其编码序列及用途

说明书

本发明属于分子生物学和医学领域，具体地说，本发明涉及新的编码诱导细胞凋亡蛋白CIDE-C(cell death-inducing DFF45-like effector C)的多核苷酸，以及此多核苷酸编码的多肽。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的用途和制备。具体地说，本发明的多肽是CIDE家族的一个新成员。

细胞凋亡是细胞生命的基本特征之一。它在胚胎发育、机体内环境稳定、细菌与病毒感染细胞的清除过程中起重要的作用。许多疾病的发生与细胞凋亡失控有关。如肿瘤、自身免疫综合症及持续的病毒感染与细胞凋亡减少密切相关；而神经退化性疾病(如帕金森氏病、老年性痴呆等)及缺血性心肌损伤与细胞过度凋亡有关。

细胞凋亡可被多种因素诱发，凋亡细胞均表现出共同的形态学、生物化学特征，包括胞体皱缩、体积缩小、细胞核浓缩、染色体断裂等等(Tomislav，D.etal.，Oncogene，17：3207-3213，1998)。

与细胞凋亡诱发、凋控过程相关的许多蛋白因子已被发现。一条途径由线粒体途径介导，细胞色素C从线粒体中释放，与Apaf-1形成多聚体，从而招募和激活Caspase-9；另一条途径由细胞表面死亡受体介导，通过FADD与FLASH招募和激活Caspase-8。两条途径最终均激活Caspase-3，Caspase-3激活DNA片断化因子(DFF)，引起染色体断裂(Budihardjo，I.，et al.，Annual review of cell anddevelopmental biology，15：269-290，1999)。

DFF有两个亚基，核酸酶(DFF40/CAD)和它的抑制物(DFF45/ICAD)。通过与DFF45和DFF40的N端结构域同源筛选，发现了一个新的细胞凋亡诱导因子蛋白家族CIDE(cell inducing death DFF45-like effector)(Inohara，N.et al.，EMBOJ.，17：2526-2533，1998)。过量表达CIDE可以诱导细胞凋亡。目前细胞凋亡诱导因子蛋白家族有两个成员，CIDE-A和CIDE-B。

鉴于细胞凋亡与众多疾病的密切相关性，本领域迫切需要了解与凋亡有关的基因和蛋白。

本发明的目的是提供一种新的诱导细胞凋亡蛋白CIDE-C蛋白以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一目的是提供编码这些多肽的多核苷酸。

本发明的另一目的是提供生产这些多肽的方法以及该多肽和编码序列的用途。本发明的CIDE-C基因，是一个在国内外未见报道的新基因，对它的作用机理的研究将有利于加深对凋亡发生途径的分子机制的了解。

在本发明的第一方面，提供新颖的分离出的CIDE-C多肽，该多肽源自人肝组织，它包含：具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

在本发明的第二方面，提供编码分离的这些多肽的多核苷酸，该多核苷酸包含一个核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少75％相同性：(a)编码上述CIDE-C多肽的多核苷酸；和(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地，该多核苷酸编码具有SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的多肽。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中11-724位的序列；(b)具有SEQ ID NO：1中1-1191位的序列。

在本发明的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。

在本发明的第四方面，提供了制备具有CIDE-C蛋白活性的多肽的方法，该方法包含：(a)在适合表达CIDE-C蛋白的条件下，培养上述被转化或转导的宿主细胞；(b)从培养物中分离出具有CIDE-C蛋白活性的多肽。

在本发明的第五方面，提供了与上述的CIDE-C多肽特异性结合的抗体。还提供了可用于检测的核酸分子，它含有上述的多核苷酸中连续的15-1190个核苷酸。

在本发明的第六方面，提供了模拟、促进、拮抗CIDE-C多肽活性的化合物，以及抑制CIDE-C多肽的表达的化合物。还提供了筛选和/或制备这些化合物的方法。较佳地，该化合物是CIDE-C多肽的编码序列(或其片段)的反义序列。

在本发明的第七方面，提供了检测样品中是否存在CIDE-C蛋白的方法，它包括：将样品与CIDE-C蛋白的特异性抗体接触，观察是否形成抗体复合物，形成了抗体复合物就表示样品中存在CIDE-C蛋白。