[发明专利]一种多肽——网状细胞指蛋白－31.57和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种多肽——网状细胞指蛋白-31.57，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

锌指蛋白在生物活细胞中起着重要的作用，其中最重要的是作为转录调节因子发挥作用[Berg J.M.，Shi Y.et al.，Science，1996，271：1081-1085]。锌指蛋白中有一种C3HC4型叫环指蛋白，有环指基元。这类蛋白是一种新类型的锌指蛋白，它们在金属数目，间隙，序列同源性方面都不同于以前发现的一般的锌指结合蛋白。环指基元可以简单的定义为Cys-X2-Cys-X(9-39)-Cys-X(1-3)-His-X(2-3)-Cys-X2-Cys-X(4-48)-Cys-X2-Cys，其中X是任何一个氨基酸(Freemont PS，Ann NY Acad Sci1993，684：174-192)。研究发现，主要有两种序列类似于环指蛋白基元。一种叫LIM的结构域包含有8个保守的金属配基，其间隙与环指蛋白类似，但在单个金属之间有更大的序列保守性(Schwabe JWR，Klug A，Nat Struct Biol，1994，1：345-349)。另一种叫PHD或LAP的结构域也包含了8个保守的金属配基，同时与LTM结构域和环指基元相似(Aasland R.et al.，Trends Biochem Sci 1995，20：56-59)。

环指蛋白基元包括8个金属配基，每个环指分子结合2个锌原子，每个锌原子与4个或3个半胱氨酸以及1个组氨酸四分同裂的方式连接(Everett RD.et al.，J MolBiol 1993，234：1329-1047)(Barlow PN.et al.，J Mol Biol 1994，237：201-211)。环指蛋白的3D结构表明，它的锌原子连接系统是结构域中唯一的，并被称为“cross-brace”基元。在这个系统中，第一对配基(Cys1，Cys2)与第三对配基(Cys4，Cys5)共用一个锌原子，第二对配基(Cys3，His1)与第四对配基(Cys6，Cys7)共用第二个锌原子。这样，尽管每个环指蛋白分子结合两个锌原子，但不会形成两个小的结构域，而是一个完整的结构单元。环指蛋白基元有两个结构。它们是IEEHV环指结构域和PML环指结构域。IEEHV结构域采用的是一个β-β-α-β折叠形式，PML结构域采用的是一个β-β-β-loop-α-β的折叠形式。在两种结构域中，His1和Cys4之间的距离为14埃，这是高度保守的，这暗示所有锌原子之间的距离是高度保守的。环指蛋白基元的其它保守特征还有：β片层的总体拓扑结构，“cross-brace”锌原子连接系统，形成疏水核心的几个保守氨基酸残基包装。这些保守特征可能在所有环指蛋白家族中都是共有的。因此，环指基元形成了一个方便的支架系统，这个系统的结构性改变反映出该家族蛋白分子功能的多样性。

环指蛋白的功能除了能与DNA结合从而调节基因转录、表达以外，还有能在细胞内多蛋白中积聚大分子、调节蛋白与蛋白之间的反应。环指蛋白结构域可能是潜在的同源寡聚化结构域或与其它靶蛋白作用。环指蛋白在发挥这些功能时，其分子必须是完整的。

C3HC4型锌指蛋白家族成员庞大，这些蛋白几乎能在人类的各个组织、器官中表达。C3HC4型锌指蛋白家族成员功能繁多，具体就这些功能而言包括但不限于以下几种：激活和重排免役球蛋白以及T细胞受体，调节白介素-2受体α链启动区域或HIV-1LTR启动区域基因的表达，调节人类精子细胞的发育，连接rfp蛋白N末端和酪氨酸激酶产生ret转化蛋白，与哺乳动物乳腺癌有关，稳定CDK激酶和细胞周期蛋白H复合体，作为转录因子与多种肿瘤发生有关。

本发明的网状细胞指蛋白(RFPL)蛋白是具有锌指功能域的蛋白家族成员。RFPL基因包括3个高度同源的部分(RFPL1，RFPL2，RFPL3)，它们分别具有环指蛋白，卷曲螺旋及B30-2结构域。它们通过促进二聚或非二聚作用参与介导蛋白与蛋白之间的相互作用，其中RFPL1和RFPL3的蛋白表达产物RFPL1S和RFPL3S在睾丸、成人大脑和胎儿大脑中含量高，可能是RFPL基因的转录后调节因子。该蛋白与环指蛋白在结构、功能上均高度相似，最显著的区别是在该蛋白环指部分的C3H4功能域中，一个半胱氨酸取代了组氨酸；另一个差别在于该蛋白缺少通常定位于环指与卷曲螺旋之间的B盒结构域。(Genome Research，1999，9(9)：803-814)