[发明专利]快速革兰氏染色液及方法

说明书

本发明涉及革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌快速革兰氏染色液，本发明还涉及快速革兰氏染色液的操作方法。

革兰氏染色液，首先采用结晶紫溶液或龙胆紫溶液(95％酒精100毫克，结晶紫400毫克)20毫克、1％草酸铵溶液8毫克，分别配合，然后混合；其次采用卢戈氏碘液，碘化钾200毫克、碘100毫克、蒸馏水300毫克，先用200毫克蒸馏水，将200毫克碘化钾溶解，然后再加入100毫克碘充分混合，使碘完全溶解，然后加蒸馏水至300毫克；再一种是脱色剂，采用95％酒精；最后用复染液、碱性复红10毫克、95％酒精10毫克、5％石碳酸90毫克。其操作步骤是：首先涂片在火焰上固定，滴加结晶紫溶液染1分钟，水洗，其次是滴加卢戈氏碘液，染1分钟后水洗；再次是滴加95％酒精脱色，此时应将玻片不时摇动，直至无紫色脱落为止，30秒钟后水洗；第四是滴加复染液染1分钟，水洗，待干，镜检。上述方法主要存在的问题是：一是结晶紫与草酸铵溶液混合后，保存时间短，若有沉淀出现，应重新配制使用，成本高；二是卢戈氏碘液放久后易变质，操作中，稍有不慎，就产生不同结果，而且整个染色过程需要210秒，比较费时间，增加了操作人员的劳动强度。

本发明的目的在于提供一种易配制、不变质、成本低、保存时间长的快速革兰氏染色液。

本发明的另一目的在于提供一种操作方便，快速、准确的操作方法。

本发明的目的是这样实现的：

染色液，由如下几种原料配制：

A、结晶紫溶液

    结  晶  紫    600-1000毫克  无水乙醇  8-12毫克

    丙二醇甲醚    8-12毫克      草 酸 铵  700-900毫克

    蒸  馏  水    70-90毫克

    混合均匀，不产生沉淀，保存1-2年。

B、碘液

    碘化钾200-500毫克    碘50-300毫克

  氯化钠  150-350毫克    蒸馏水80-120毫克

  混合均匀，呈棕色并存放，不变质，保存1-2年。

C、脱色剂

  丙  酮  35-45毫克    95％乙醇55-65毫克

  混合均匀。

D、复染液

  碱性品红  450-550毫克    无水乙醇8-12毫克

  5％石碳酸  8-12毫克      吐温-80 200-500毫克

  蒸馏水    70-90毫克

其操作方法是：

1、涂片经火焰固定，加结晶紫溶液，染3-7秒水洗，用滤纸吸干水份；

2、加碘液染3-7秒，水洗，用滤纸吸干水份；

3、加脱色剂不断摇动，至无紫色脱落为止10-30秒，水洗；

4、加复染液染3-7秒，水洗，干后镜检。便得菌体呈紫色为革兰氏阳性菌，呈红色为革兰氏阴性菌。

快速革兰氏液的碘液进入菌体后，有足够的量迅速与结晶紫结合，此结合物又与革兰氏阳性菌体内的核糖核酸镁盐蛋白质复合物结合，因此，革兰氏阳性菌摄取结晶紫多且较牢固、革兰氏阴性菌缺乏核糖核酸镁盐，所以，不与结晶紫结合，而被石碳酸复红结合。革兰氏阳性菌的等电点(PH2-3)比阴性菌(PH4-5)为低，在一定PH下所带负电荷较多，因此容易和带正电荷的碱性染料结合，不易被脱色剂脱色。革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌菌膜的通透性不同，脱色剂相应采用95％酒精和丙酮的混合液，革兰氏阳性菌不易透入，故不易脱色，由于丙酮溶解性强，使染料和碘复合物溶解彻底，所以，不会产生假革兰氏阳性菌。

本发明与现有技术相比，具有以下优点和效果：配比容易，易于被临床医务人员掌握，特别适合初学者，染色全过程只需30秒，操作方便，不造成假阳性和假阴性，不沉淀，不变质，成本低廉，存放时间长1-2年，易携带，易掌握，能快速、方便、准确检测细菌，尤其适合农村基层卫生单位。

实施例1：

染色液有如下原料制配

A、结晶紫溶液

  结  晶  紫  800毫克  无水乙醇  10毫克

  丙二醇甲醚  10毫克   草 酸 铵  800毫克

  蒸  馏  水  80毫克

B、碘液

  碘化钾  300毫克    碘       150毫克

  氯化钠  270毫克    蒸馏水   100毫克

C、脱色剂

  丙  酮  40毫克    95％乙醇  60毫克

D、复染液