[发明专利]弓形虫虫体、风疹、巨细胞、疱疹Ⅰ、Ⅱ病毒抗原纯化工艺

权利要求书

1、一种TORCH抗原纯化工艺，其特征在于含有下述步骤：(1)将风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒I型、II型的培养液，经离心去除细胞碎渣后，沉淀离心分离得病毒沉淀物；(2)将弓形虫腹水离心去除细胞，然后加入的0.01mol、PH＝7的磷酸盐(PBS)缓冲液稀释，离心后弓形虫腹水与缓冲液的体积比为1∶(0.8-1.3)，再沉淀后离心分离得弓形虫病毒沉淀物；(3)将上述(1)、(2)两步沉淀所取得的病毒深沉物分别溶于0.01mol、PH＝8.0的Tris-HCl-0.001molEDTA的缓冲液中；然后再将溶解液采用透析得病毒浓缩液；(4)将病毒浓缩液用离子交换柱进行分离并用0.01mol、PH＝8的Tris-HCl-0.001molEDTA缓冲液含0.2-0.5mol的NaCl作梯度洗脱，收集各蛋白峰，包被酶标板，并用已知阳性血清，做间接ELISA试验检测抗原活性高峰液收集，即为纯化TORCH抗原。

2、如权利要求1所述的TORCH抗原纯化工艺，其特征在于所述的细胞沉淀工艺可采用盐析沉淀、有机溶剂沉淀和非离子多聚物沉淀工艺。

3、如权利要求1或2所述的TORCH抗原纯化工艺，其特征在于所述的盐析沉淀工艺含有下述步骤：(1)将风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒I型、II型的培养液经离心后的病毒液和弓形虫腹水经离心后的虫体稀释液分别加入饱和硫酸铵至饱和度达20-60％，混匀，在4℃下静置再离心分离得病毒沉淀物；(2)将病毒沉淀物溶于体积比为1∶(5-10)的0.01mol、PH＝7.0的PBS缓冲液中；(3)将上述溶解液再加入饱和硫酸铵至饱和度达20-60％进行二次沉淀，经离心分离得沉淀物，并将沉淀物按(2)步的溶解工艺溶解；(4)重复(3)步工艺至少一次，并将最后的沉淀物溶于体积比为1∶(0.5-1.5)的0.01mol、PH8.0的Tris-HCl-0.001molEDTA缓冲液中。

4、如权利要求3所述的TORCH抗原纯化工艺，其特征在于所述的硫酸铵还可用硫酸钠代替，但其浓度为10-20％，其余工艺步骤和参数不变。

5、如权利要求1或2所述的TORCH抗原纯化工艺，其特征在于所述的有机溶剂沉淀工艺是将风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒I型、II型的培养液经离心后的病毒液和弓形虫腹水经离心后的虫体稀释液分别加入乙醇和/或丙酮至浓度达50-80％进行沉淀，离心分离得病毒沉淀物，再将沉淀物溶于体积比为1∶(0.5-1.5)的0.01mol、PH8.0的Tris-HCl-0.001molEDTA缓冲液中。

6、如权利要求1或2所述的TORCH抗原纯化工艺，其特征在于所述的非离子多聚物沉淀工艺是将采风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒I型、II型的培养液经离心后的病毒液和弓形虫腹水经离心后的虫体稀释液分别加入葡聚糖/右旋糖酐硫酸钠至浓度达5-15％进行沉淀，离心分离得病毒沉淀物，再将深沉物溶于体积比为1∶(0.5-1.5)的0.01mol、PH8.0的Tris-HCl-0.001molEDPA缓冲液中。

7、如权利要求1所述的TORCH纯化抗原工艺，其特征在于所述的离子交换柱可选自DEAE纤维素柱、DEAE Sepharose Fast Flow柱、Qsepharose FastFlow柱中的任一种。