[发明专利]一种制备高纯度淫羊藿甙的方法

说明书

本发明涉及的是一种应用高速逆流色谱(HSCCC)法从淫羊藿粗提物中制备高纯度的淫羊藿甙的方法。

淫羊藿为小檗科淫羊藿属(Epimediun brevicornum Maxim.)的地上部分，用于补肾状阳、强筋骨、怯风湿，治疗阳痿遗精、风湿痹痛等症。现代药理表明淫羊藿尚有免疫调节、抗肿瘤及心血管等方面的作用。淫羊藿甙为其主要的有效成分。以前报道的淫羊藿甙的提取分离主要是采用柱色谱法，包括硅胶柱、聚酰胺柱、氧化铝柱和凝胶柱。但是所有的这些柱色谱都需要使用固体填料，易产生不可逆吸附，具有样品易损失、易污染、低效、速度慢和分离步骤烦琐等缺点。高速逆流色谱技术不同于传统的柱色谱，不需使用固体填料，而是应用两相互不混溶的溶剂系统在支撑管内高速行星运动的方式下进行天然产物的分离纯化。因而没有不可逆吸附，具有样品无损失、无污染、高效、快速和大制备量分离的优点。所以，在国内外已被广泛应用于生物、医药、环保和农业等领域中活性物质的分离纯化。

本发明的目的是应用高速逆流色谱HSCCC法从淫羊藿粗提物中制备高纯度的淫羊藿甙。

该发明方案如下：采用分析型高速逆流色谱仪的小量制备及半制备型高速逆流色谱仪的较大量制备。可选用的溶剂体系由三个组分组成，A组分可以为氯仿，二氯甲烷，四氯化碳，1，2-二氯乙烷等氯代物；B组分可以为甲醇，乙醇，乙腈，丙酮等；C组分为水。优选氯仿--甲醇-水体系。体积比依次为2-6∶1-5∶1-4。一次分离可以得到淫羊藿甙。室温对分离度有一定的影响，以上分离条件适合室温在18-30℃时使用。当室温降低时，降低甲醇的比例，以提高分离度。反之亦然。

本发明应用高速逆流色谱技术HSCCC从淫羊藿粗提物中制备高纯度的淫羊藿甙的方法，不同于传统的柱色谱，不需使用固体填料。而是应用两相互不混溶的溶剂系统在支撑管内高速行星运动的方式下进行天然产物的分离纯化。因而没有不可逆吸附，具有样品无损失、无污染、高效、快速和大制备量分离的优点。获得的淫羊藿甙纯度可达98％以上。适用于从由各种工艺条件制备的淫羊藿粗品中分离制备淫羊藿甙单体。适用于用各种型号的逆流色谱仪分离制备淫羊藿甙单体。如：用分析型高速逆流色谱仪的小量制备及半制备型高速逆流色谱仪的较大量制备。

实施例1

采用分析型高速逆流色谱仪，溶剂选用氯仿--甲醇-水体系从淫羊藿粗品中分离制备淫羊藿甙单体。首先以4∶3∶2.5体积比将上述溶剂体系配置于分液漏斗中，摇均后静置分层。待平衡一段时间后将上相和下相分开。取上相为固定相，下相为流动相，取5mg淫羊藿粗提物溶解于1ml上相和1ml下相的混合物中待用。采用北京市新技术应用研究所研制开发的GS10A2分析型高速逆流色谱仪，并配有柱塞泵、进样阀、紫外检测器和记录仪，多层缠绕聚四氟乙烯的柱容量约为40ml。先用固定相充满整个柱子；调整主机转速到1700rpm，以1.0毫升/分的流速将流动相泵入柱内；待整个体系建立动态平衡后，由进样阀进样；然后根据检测器紫外谱图接收目标成分，室温在18-30℃时，纯度都在98％以上。

实施例2

采用半制备型高速逆流色谱仪，溶剂选用1，2-二氯乙烷-乙醇-水体系分离制备淫羊藿甙单体。首先以3∶2∶1体积比将上述溶剂体系配置于分液漏斗中，摇均后静置分层。待平衡一段时间后，将上相和下相分开，取上相为固定相，下相为流动相。取100mg淫羊藿粗提物溶解于10ml上相和10ml下相的混合物中待用。采用北京市新技术应用研究所研制开发的GS10A2型半制备高速逆流色谱仪，并配有柱塞泵、进样阀、紫外检测器和记录仪。起多层缠绕聚四氟乙烯的柱容量约为240ml。先用固定相充满整个柱子；调整主机转速到800rpm，以2.0ml/min的流速将流动相泵入柱内；待整个体系建立动态平衡后，由进样阀进样；然后根据检测器紫外谱图接收目标成分。旋转蒸发后，冷冻干燥。得到淫羊藿甙单体。纯度都在97％以上。

实施例3

采用半制备型高速逆流色谱仪，溶剂选用四氯化碳-丙酮-水，体积比依次为5∶4∶3。分离制备淫羊藿甙单体，上样量为200mg，方法同实施例2，检测器紫外谱图接收目标成分。纯度都在97％以上。

实施例4采用半制备型高速逆流色谱仪，溶剂采用二氯甲烷-甲醇-水，体积比依次为6∶5∶4分离制备淫羊藿甙单体，上样量为200mg，其他同实施例2。检测器紫外谱图接收目标成分。