[发明专利]抗家禽病毒病的作物及其生产方法

权利要求书

1、一种抗家禽禽流感、新城疫和传染性法氏囊病三种病毒病中的一种、二种或三种疾病的作物，包括玉米、水稻、小麦、大豆和油菜等，其特征在于：它们完整地表达了禽流感病毒，新城疫病毒和传染性法氏囊病毒中的任意一种、二种或三种病毒的抗原并可使家禽产生有效免疫力，用以表达的免疫原性蛋白基因为：

(1)禽流感病毒的主要免疫原性蛋白基因即HA基因：ttgaattcttgaattcatggaaagaacagtgcttcttcttgcaacagtcagtcttgttaaaagtgatcagatttgcattggttaccatgcaaacaactcgacagagcaggttgacacaataatggaaaagaatgttactgttacacatgcccaagacatactggaaaggacacacaacgggaagctctgcgatctaaatggagtgaagcctctcattttgagggattgtagtgtagctggatggctcctcggaaaccctatgtgtgacgaattcatcaatgtgccggaatggtcttacatagtggagaaggccagtccagccaatgacctctgttatccagggaatttcaacgactatgaagaactgaaacacctattgagcagaataaaccattttgagaaaattcagatcatccccaaaagttcttggtccaatcatgatgcctcatcaggggtgagctcagcatgtccataccttgggaggtcctcctttttcagaaatgtggtatggcttatcaaaaagaacagtgcatacccaacaataaagaggagctacaataataccaaccaagaagatcttttggtactgtggggggttcaccatcctaatgatgcggcagagcagacaaagctctatcaaaatccaaccacctacatttccgttggaacatcaacactgaaccagagattggttccagaaatagctactagacccaaagtaaacgggcaaagtggaagaatggagttcttctggacaattttaaagccgaatgatgccatcaatttcgagagtaatggaaatttcattgctccagaatatgcatacaaaattgtcaagaaaggggactcaacaattatgaaaagtgaattggaatatggtaactgcaacaccaagtgtcaaactccaatgggggcgataaactctagtatgccattccacaacatacaccccctcaccatcggggaatgccccaaatatgtgaaatcaaacagattagtccttgcgactggactcagaaatacccctcaaagagagagaagaagaaaaaagagaggactatttggagctatagcaggttttatagagggaggatggcagggaatggtagatggttggtatgggtaccaccatagcaatgagcaggggagttgctactctgcagacaaagaatccactcaaaaggcaatagatggagtcaccaataaggtcaactcgatcattaacaaaatgaacactcagtttgaggccgttggaagggaatttaataacttggaaaggaggatagagaatttaaacaagaagatggaagacggattcctagatgtctggacttacaatgctgaacttctggttctcatggaaaatgagagaactctcgactttcatgactcaaatgtcaagaacctttacgacaaggtccgactacagcttagggataatgcaaaggagctgggtaatggttgtttcgaattctatcacaaatgtgataatgaatgtatggaaagtgtaaaaaacggaacgtatgactacccgcagtattcagaagaagcaagactaaacagagaggaaataagtggagtaaaattggaatcaatgggaacttaccaaatactgtcaatttattcaacagtggcgagttccctagcactggcaatcatggtagctggtctatctttatggatgtgctccaatggatcgttacaatgcagaatttgcatttaaatttgtgagttcagattgtagttaaaaacaccctgacgtcgagacgtacc

(2)新城疫病毒的主要免疫原性蛋白基因即F基因：ttgaattcatgggccccaaatcttctaccaatgtcccagcacctctgatgctgaccgtcaggattgcgctggcactgagctgtgtccgtctgacaaattctctcgatggaaggcctcttgcagctgcagggattgtagtaacgggagacaaagcagtcaacatatacacctcatctcagacagggtcaataatagtcaagttactcccaaatatgcctaaggataaagaggcgtgtgcaaaagccccgttggaggcatacaacaggacactgactgctttgctcaccccccttggtgattctatccgcaggatacaagagtctgcgactacgtccggaggaaggaggcagagacgctttataggtgccattatcggcagtgtagctcttggggttgccacagctgcccagataacagcagcctcagctctgatacaagccaaccagaatgctgccaacatcctccggcttaaagagagcattgctgcaactaatgaagctgtacatgaagtcactgacggattatcgcaactagcagtggcagttgggaagatgcagcagtttgttaatgaccagtttaataacacagctcaggaattggactgtataaaaattacacagcaggttggtgtagaactcaacctgtacctaactgaattgactacagtattcgggccacaaatcacttcccctgccttaactcagctgactatccaggcgctttacaatctagctggtggtaagatggattatttgttgactaagttaggtgttgggaacaaccaactcagctcattaatcggtagcggcttgatcaccggtaaccctattctgtacgattcacagactcaactcttaggtatacaggtaactttaccctcagtcggtaacctaaataatatgcgtgctacctacttggagaccttgtctgtaagcacaaccaagggatttgcctcagcacttgtcccaaaagtggtgacacaggtcgggtctgtgatagaggaacttgacacctcatactgtgtagagaccgatttggatttatattgtacaagaatagtgacattccctatgtctcctggtatttattcctgtctgagcggtaatacatcagcttgcatgtattcaaagactgaaggtgcacttactacgccatatatgactatcaagggctcagttattgccaattgcaagataacaacatgcagatgtgcagaccctccgggtatcatatcgcaaaattatggagaagctgtgtctctaatagataggcactcatgcaatgtcttatccttagacgggataactttgaggctcagtggagaatttgacgtaacttatcaaaagaatatctcaatattagattctcaggtaatagtgacaggcaatctcaatatctcaactgaacttgggaatgtcaacaactcgataagtaatgctttggataagttagaggaaagcaatagcaaacttgacaaagtcaatgtcaagctgaccggcacgtctgctctcattacctatatagttttaactatcatatctcttgtttgtggtatacttagcctggttctagcatgctatctgatgtataagcaaaaggcgcaacaaaagaccttattatggcttgggaataataccctaaatcagatgagggccactacaagaatctgaacacagagacgtccc

(3)法氏囊病毒的主要免疫原性蛋白基因即VP2基因：ttgaattcatgacaaacctgcaagatcaaacccaacagattgttccgttcatacggagccttctgatgccaacaaccggaccggcgtccattccggacgacaccctggagaagcacactctcaggtcagagacctcgacctacaatttgactgtgggggacacagggtcagggctaattgcctttttccctggattccctggctcaattgtgggtgctcactacacactgcagagcaatgggaactacaagttcgatcagatgctcctgactgcccagaacctaccggccagctacaactactgcaggctagtgagccggagtctcacagtaaggtcaagcacactccctggtggcgtttatgcactaaacggcaccataaacgccgtgaccttccaaggaagcctgagtgaactgacagatgttagctacaatggattgatgtctgcaacagccaacatcaacgacaaaattgggaacgtcctagtaggggaaggggtcaccgtcctcagcttacccacatcatatgatcttgggtatgtgagacttggtgaccccatacccgctatagggcttgacccaaaaatggtagcaacatgtgacagcagtgacaggcccagagtctacactataactgcagccgatgattaccaattctcatcacaataccaacaaggtggggtaacgatcacactgttctcagccaacattgatgccatcacaagcctcagcgttgggggagagcttgtgtttaaaacaagcgtccacagccttgtactgggcgccaccatctaccttataggctttgatgggactgcggtaatcactagagctgtagccgcaaacaatgggctgacgaccggcatcgacaatcttatgccattcaatcttgtgattccaaccaacgagataacccagccgatcacatccatcaaactggagatagtgacctccaggagtggtggtcaggcaggggatcagatgtcatggtcggcaagtgggagcctagcagtgacgatccatggtggcaactatccaggggccctccgtcccgtcacactagtagcctacgaaagagtggcaacaggatctgtcgttacgctcgccggggtgagcaacttcgagctgatcccaaatcctgaactagcaaagaacctggttacggaatacggccgatttgacccaggggccatgaactacacaaaattgatactgagtgatggggaccgtcttggcatcaagaccgtctggccaacaagggagtacacagactttcgtgagtacttcatggaggtggccgacctcaactctcccctgaagattgcaggagcatttggcttcaaagacataatccgggccataagggacgtccc

2、根据权利要求1所述的作物的生产方法，其特征在于：进行基因重组和重组蛋白的制备，在生产过程中将上述三种病毒的主要免疫原基因

(1)插入质粒载体：采用分子生物学的方法提抽病毒的核酸RNA，用含启动子和终止子，针对不同病毒所设计的三对特异性引物扩增出各自相应的完整免疫原基因，片段两端为内切酶位点(Xba I和sal I)，用相应的内切酶切表达载体和目的片段，T4连接酶连接重组，构建各自的重组质粒；

(2)将上述重组质粒转入植物玉米、水稻、小麦、大豆和油菜中进行表达，获得转基因植物的种子：将重组质粒转化根癌农杆菌C58C1菌株细胞系，于含卡那霉素的LB中培养，离心收集细胞，于含蔗糖和L6-BA的MS培养液中重悬，再将培养好的植物茎叶浸入含根癌农杆菌细胞的重悬液中真空浸润，用水冲洗，存放至成熟，用含MS、蔗糖和MES的GM和卡那霉素的琼脂凝胶筛选分别单抗禽流感、新城疫或传染性法氏囊病的转基因种子，或者用重组质粒包裹金弹，采用基因轰击的方法进行转化，将分别携有单抗禽流感、新城疫或传染性法氏囊病的转基因种子培育至待授粉植株时，采用传统的杂交方法将单抗禽流感、新城疫或传染性法氏囊病的植株进行两两杂交或者三者杂交，获得同时抗禽流感、新城疫或传染性法氏囊病三种病毒病中的任意两种或者对三种疾病同时具有抵抗作用的转基因种子；

(3)取种子种入土壤，获得可作为饲料原料的植物根、茎、叶、果实或种子。