[发明专利]一种N－端缺失脂肪细胞补体相关蛋白及其制备方法

权利要求书

1.一种新型重组人N-端缺失脂肪细胞补体相关蛋白，其特征在于改变人全长脂肪细胞补体相关蛋白的结构，具有SEQ ID NO：1的氨基酸序列和SEQ ID NO：2的核甘酸序列。

2.根据权利要求1所述的重组人N-端缺失脂肪细胞补体相关蛋白，其特征在于所述的重组相关蛋白其分子量比全长蛋白小，其结构改变是将Phe176替换为Asp176，改变了176位氨基酸极性。

3.一种制备新型人N-端缺失脂肪细胞补体相关蛋白的方法，其特征在于采用下列步骤：(1)设计新型人N-端缺失脂肪细胞补体相关蛋白分子结构；(2)在适于表达的载体中表达人N-端缺失脂肪细胞补体相关蛋白   基因；(3)用重组载体转染适于表达的宿主细胞；(4)在适于表达该cDNA片段的条件下培养宿主细胞，从中回收和   纯化所需产物。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所使用的载体不限于特定的表达载体，只要它能够与所述cDNA片段重组，形成适宜表达的质粒。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所使用的载体为原核表达载体。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所使用的载体为pLY4。

7.根据权利要求3所述的方法，其中所使用的宿主细胞不限于特定的宿主细胞，只要它能够表达所述重组表达载体。

8.根据权利要求7所述的方法，其中使用的宿主细胞为大肠杆菌JF1125。

9.根据权利要求3所述的方法，其中培养宿主菌的方法是发酵方法，用低营养培养基30℃扩增工程菌，达一定菌体浓度后42℃诱导表达。发酵参数为：温度42℃，氧容量控制在33-40％间，PH为5，搅拌速度与OD连动。

10.根据权利要求3所述的方法，其中重组人N-端缺失脂肪细胞补体相关蛋白的最终产物是通过工程菌发酵后匀浆，经变性复性、凝胶过滤、离子交换法纯化获得。

11.根据权利要求1-3所述的人N-端缺失脂肪补体相关蛋白在制备防治肥胖和糖尿病疾病药物中的应用。

SEQ ID NO： 1

1                                       30

AYVYRSAFSVGLETYVTIPNMPIRFTKIFY

31                                      60

NQQNHYDGSTGKFHCNIPGLYYFAYHITVY

61                                      90

MKDVKVSLDKKDKAMLFTYDQYQENNVDQ

91                                      120

ASGSVLLHLEVGDQVWLQVYGEGERNGLYA

121

DNDNDSTFTGFLLYHDTN

SEQ ID NO：2GCC TAT GTA TAC CGC TCA GCA TTC AGT GTG GGA TTG GAG ACT TAC GTTACT ATC CCC AAC ATG CCC ATT CGC TTT ACC AAG ATC TTC TAC AAT CAGCAA AAC CAC TAT GAT GGC TCC ACT GGT AAA TTC CAC TGC AAC ATT CCTGGG CTG TAC TAC TTT GCC TAC CAC ATC ACA GTC TAT ATG AAG GAT GTGAAG GTC AGC CTC GAC AAG AAG GAC AAG GCT ATG CTC TTC ACC TAT GATCAG TAC CAG GAA AAT AAT GTG GAC CAG GCC TCC GGC TCT GTG CTC CTGCAT CTG GAG GTG GGC GAC CAA GTC TGG CTC CAG GTG TAT GGG GAA GGAGAG CGT AAT GGA CTC TAT GCT GAT AAT GAC AAT GAC TCC ACC TTC ACAGGC TTT CTT CTC TAC CAT GAC ACC AAC