[发明专利]抗乙型肝炎病毒preS1抗原的人源单链抗体

说明书

本发明属于医学生物工程领域，特别涉及到基因工程抗体领域，是抗体工程的最前沿，即全人源化基因工程抗体方面的研究结果。

抗体工程是当代生物医学的前沿技术，运用免疫学，分子生物学，生物化学，药理学，生物物理学，生物工程及医学等多学科的理论方法，研究抗体的结构和功能。其宗旨在于：设计构建新型抗体，应用与临床检验和治疗。

乙型肝炎是一种流行广、难治愈的传染性疾病。目前，全球有3亿乙型肝炎病毒携带者，不完全统计认为中国有3000万慢性乙型肝炎患者。乙型肝炎不仅导致肝硬化，而且是肝癌的原因病毒。病毒性乙型肝炎的临床治疗仅停留在免疫增强剂，没有确切的疗效。近1-2年出现了动物源性单克隆抗体，用于临床治疗乙型肝炎。但是因为物种差异，其具有很强的免疫原性，不仅疗效甚微，更易于引起免疫损伤，严重者导致死亡。既往文献报导，针对乙型肝炎病毒的人-鼠嵌合抗体、移植抗体均已获得，在一定程度上减少了抗体的鼠源性成分。目前这一领域的研究热点集中于全人源化基因工程抗体，以期最大限度去除鼠源性成分，满足临床治疗要求。作为抗乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的人源Fab抗体也已经获得。但是，乙型肝炎病毒表面抗原具有多种变异，就一种抗原获得的抗体难以有效中和所有病毒亚型，也使其未来的临床应用受到很大限制。而乙型肝炎病毒表面抗原的组分之一，preS1抗原，相对保守的多。而且，临床资料证实，抗preS1抗体的出现与乙型肝炎的临床治愈密切相关。所以，全人源化抗preS1的基因工程抗体的开发具有非常重要的意义。作为基因工程抗体的一种，单链抗体(ScFv)是将抗体重链和轻链的V区通过连接肽连接成的重组蛋白。它的优点在于它是一种分子量最小的活性抗体片段：仅为原抗体分子量的1/6。它可以迅速渗透包括肿瘤的各种组织，体内清除速度快，并适于进一步分子改造。而且，它不含有Fc段，能够更特异地结合靶器官。因此，本发明以获得全人源化抗preS1的单链抗体(ScFv)为目的。

本发明的目的是：获得全人源化抗preS1的单链抗体(ScFv)，解决动物源性抗体容易引起免疫损伤的问题，同时实现一种抗体拮抗多种病毒亚型。为将来临床治疗乙型肝炎提供可行性的抗体药物。该抗体基因可以与质粒DNA一起稳定、无限复制，以其低成本使未来广泛应用成为可能。

实现本发明的技术方案是：选择健康供者60人，每人取外周血2ml，以淋巴细胞分离液提取淋巴细胞，与乙型肝炎病毒preS1抗原共培养，体外致敏后，提取总RNA，经过RT-PCR，以人抗体基因特异引物，PCR扩增人抗体的轻链，重链可变区。再通过Linker基因连接轻链和重链基因，组装成单链抗体基因。利用噬菌体展示技术，将得到的单链抗体基因插入噬粒载体，转化大肠杆菌，构建人源免疫单链抗体库。用乙型肝炎病毒preS1抗原对该抗体库进行固相淘选，获得抗乙型肝炎病毒preS1抗原的人源化单链抗体。

本发明的效果和益处是：本发明所陈述的抗乙型肝炎病毒preS1抗原的人源化单链抗体，对人体没有物种差异，不会导致免疫损伤。而且特异性更好，与靶器官的结合率高。在将来的临床治疗中，将发挥现有的抗乙型肝炎病毒的抗体性药物所达不到的效果。