[发明专利]水稻矮缩病毒第六号基因片段

权利要求书

1.水稻矮缩病毒第六号基因片段，属于细胞间运动蛋白。

2.如权利要求1所述的水稻矮缩病毒第六号基因片段，其生物学功能的确定方法包括以下步骤：

(1)将RDV-S6基因采用合适的限制性内切酶释放出来，克隆入带有CaMV 35S启动子的植物瞬间表达载体，经过抗生素筛选以及酶切鉴定后确认得到了植物瞬时表达质粒：pRLRS6；

(2)将上述表达质粒与含有Gus报告基因的马铃薯X病毒细胞间运动缺陷型株pPVX25KmGUS一起快速导入烟草叶片中，证明运动缺陷型病毒株pPVX25KmGUS在烟草叶片中的细胞间运动可以通过共表达RDVS6基因而得以互补恢复，而RDV基因组中其他基因组分不具备上述功能。

3.如权利要求1所述的水稻矮缩病毒第六号基因片段，其生物学功能的确定方法包括以下步骤：

(1)采用两步重组PCR的方法获得S6与增强型绿色荧光蛋白(EGFP，Clontech)的融合基因：根据RDV S6基因和EGFP基因碱基序列，分别设计了两对引物，通过高保真PCR方法扩增出RDV S6基因和EGFP基因片段，用PCR产物纯化试剂盒，将第一轮PCR产物回收，并以此产物为模板，用S6正向引物和EGFP反向引物进行第二轮PCR，最后得到S6和EGFP基因开放读码框融合的基因产物；

(2)将PCR得到的RDV S6-EGFP融合基因进行回收纯化，用KpnI酶切消化，克隆入带有CaMV 35S启动子的植物瞬时表达载体pRTL2(用NcoI和KpnI两种酶切开)中，经过氨卞青霉素筛选以及酶切鉴定后确认得到了植物瞬时表达质粒：pRTL2RS6-EGFP；

(3)将目的基因S6-EGFP快速导入烟草叶片，发现RDV基因S6编码蛋白(Pns6)以点状方式分布于细胞壁胞间连丝处，在细胞质中形成不规则的聚集体，而且可以进入细胞核中。

4.如权利要求1所述的水稻矮缩病毒第六号基因片段，其细胞间运动功能的应用开发。