[发明专利]诊断未受孕用的试剂盒及使用该试剂盒诊断未受孕的方法

说明书

发明背景

1.发明领域

本发明涉及一种用于诊断动物未受孕的试剂盒以及使用该试剂盒诊断动物未受孕的方法，更具体地说，涉及一种通过检测动物的血液、乳汁等中的黄体酮浓度，早期、简便地诊断动物未受孕的试剂盒及方法。

2.对相关技术的描述

正常奶牛的发情周期是19-22天，且奶牛血液或乳汁中的黄体酮的浓度在发情日几乎为0。从发情日起，黄体酮的浓度逐日提高，并且如果母牛没有受孕，通常在发情日后的第19日降低至1ng/ml以下。另一方面，如果奶牛受孕了，则黄体酮的浓度不会降低。因此，可以通过检测奶牛发情日后第19天至第22天之间未加工的乳汁或血液中的黄体酮浓度来确定奶牛是否受孕。

在二十世纪九十年代以前，通过专业人员在奶牛人工受精或交配后的50或60天给奶牛做直肠检查确定奶牛是否受孕。但是，此种方法通常要求由经验丰富的兽医进行，并且因为需要较长的时间来确认奶牛未受孕而造成很大的经济损失。此外，如果为诊断是否受孕而进行的直肠检查刺激卵巢或胚胎，还有可能发生卵巢疾病或流产并且奶牛可能受到紧张的刺激。此外，根据上述方法，可以在人工受精后的50-60天确定未受孕。如果在这一时期奶牛被检查出没有受孕，则需要重新进行捕捉未受孕动物的发情征候和人工受精的过程，这将导致重大的经济损失。

因此，从二十世纪九十年代以来，以简单便利的方式诊断奶牛受孕或繁殖问题的方法被成功地开发出来，例如，一个例子是使用超声波诊断装置诊断受孕/未受孕的方法。但是，由于未受孕诊断的许多情况需要由非专业人员在野外进行，因此需要将超声波诊断装置制造得特别结实和安全。因此，此种方法装置的缺陷是对于在野外使用太大且笨重。此后，一种通过检测血液中的黄体酮的浓度而诊断母牛是否受孕的ELISA试剂盒被开发出来，但是由于要求使用一种昂贵且精密的分析装置，且诊断方法复杂，在野外使用此种试剂盒也是困难的。

为克服这些缺陷并通过简单的方法诊断未受孕，Laitinen等人开发出了一种使用化验带(assay strip)的方法《斯堪的纳维亚化学学报》(Acta Chemica Scandinavia，1996：50：141-145)。在设计该化验带时，将黄体酮的单克隆抗体固定在硝化纤维膜上，取自母牛的试样(例如乳汁和血液)通过毛细吸引力穿过膜。此后，结合了胶态金粒子的黄体酮-卵清蛋白共轭体(以下称“黄体酮金共轭体”)迁移通过膜。

此时，如果试样中的黄体酮浓度水平较高，则黄体酮首先与黄体酮的单克隆抗体结合，黄体酮金共轭体无法与黄体酮的单克隆抗体结合而不能引起化验带的颜色变化。相反，当试样中的黄体酮浓度水平较低时，只有少量的黄体酮的单克隆抗体与试样中的黄体酮结合，稍后迁移的黄体酮金共轭体与黄体酮的单克隆抗体结合并引起化验带的颜色变化。因此，可以通过观察化验带的颜色变化或使用色层分离扫描仪确定母牛是否受孕。

但是，上述方法的缺点是由于试样和黄体酮金共轭体均需分别迁移通过化验带以分析受孕/未受孕，因此操作程序可能变得复杂。而且，当母牛受孕时，即当试样中的黄体酮浓度水平高时，甚至在诊断完成以后，化验带的颜色也没有变化并且无法防止由于化验带本身的缺陷而导致的错误。此外，使用肉眼观察，由于没有根据颜色变化诊断受孕/未受孕的客观标准，就存在每个观察者都需要进行主观诊断的问题。

本发明概述

为克服这些缺陷，本发明的一个目的是提供一种用于诊断未受孕的改进型试剂盒，以及一种通过在受精后大约20天检测血液或乳汁中的黄体酮的浓度而诊断母牛，例如奶牛未受孕的简单方便的方法。

本发明的另一个目的是提供一种用于诊断未受孕的试剂盒，以及使用该试剂盒诊断未受孕并能够防止由于化验带的缺陷而导致错误诊断的方法。

本发明的再一个目的是提供一种用于诊断未受孕的试剂盒，以及使用该试剂盒诊断未受孕并具有未受孕诊断的高度可靠性的方法。

为实现上述目标，本发明提供了一种用于诊断动物未受孕的试剂盒，其包括：一种包括多个试样迁移孔的多孔膜纸带形式的化验带，其中黄体酮-牛血清白蛋白(BSA)共轭体被固定在作为测试线的一端，并优选抗IgG被固定在作为对照线的另一端；以及用于与试样，例如血液或乳汁反应的抗黄体酮IgG-金共轭体。