[发明专利]测定血斑中血浆铜蓝蛋白浓度的方法及肝豆状核变性病筛选试剂盒和诊断试剂无效
申请号: | 01141150.3 | 申请日: | 2001-09-27 |
公开(公告)号: | CN1379247A | 公开(公告)日: | 2002-11-13 |
发明(设计)人: | 韩始薰;章暎珠;李秀英;申夏澈;朴善荣;柳恩善;韩熙成 | 申请(专利权)人: | 智诺百股份有限公司 |
主分类号: | G01N33/53 | 分类号: | G01N33/53;G01N33/577 |
代理公司: | 上海专利商标事务所 | 代理人: | 徐迅 |
地址: | 韩国*** | 国省代码: | 暂无信息 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 测定 血斑中 血浆 蛋白 浓度 方法 肝豆状核变 性病 筛选 试剂盒 诊断 试剂 | ||
1.一种血液斑点中测定全血浆铜蓝蛋白浓度的方法,其特征在于,使用全血浆铜蓝蛋白特异性多克隆抗体和全血浆铜蓝蛋白特异性单克隆抗体,利用通过酶联免疫吸附测定法得到的吸光度标准曲线测定。
2.一种血液斑点中测定全血浆铜蓝蛋白浓度的方法,其特征在于,使用全血浆铜蓝蛋白特异性多克隆抗体和全血浆铜蓝蛋白特异性单克隆抗体,利用通过解离强化的时间分辨荧光免疫测定法得到的标准浓度曲线测定。
3.如权利要求1或2所述的方法,其中,上述血液斑点利用血液过滤纸收集。
4.如权利要求1或2所述的方法,其中,上述血浆铜蓝蛋白特异性多克隆抗体,是通过将用包含全血浆铜蓝蛋白的精制的血浆铜蓝蛋白免疫兔子,而得到的血清制造的。
5.如权利要求1或2所述的方法,其中,上述血浆铜蓝蛋白特异性单克隆抗体是如下获得的:用包含全血浆铜蓝蛋白的精制的血浆铜蓝蛋白免疫小鼠,得到产生抗体的脾脏细胞,把上述脾脏细胞与骨髓瘤细胞融合及培育,得到单克隆化的杂交瘤细胞而制造。
6.如权利要求1或2所述的方法,其中,上述通过酶联免疫吸附测定法得到吸光度标准曲线的步骤包括:首先制造标准血液斑点和对照血液斑点后,将偶联有辣根过氧化物酶的血浆铜蓝蛋白特异性多克隆抗体和血浆铜蓝蛋白特异性单克隆抗体,分别施用于上述标准血液斑点和对照血液斑点。
7.权利要求6所述的方法,其中,上述吸光度标准曲线,以夹心法做成。
8.权利要求2所述的方法,其中,上述通过解离强化的时间分辨荧光免疫测定法得到标准浓度曲线的步骤包括:首先制造标准血液斑点和对照血液斑点后,以铕标记的血浆铜蓝蛋白特异性多克隆抗体和血浆铜蓝蛋白特异性单克隆抗体,分别施用于上述标准血液斑点和对照血液斑点。
9.权利要求8所述的方法,其中,上述标准浓度曲线,以夹心法做成。
10.一种利用酶联免疫吸附测定法测定血液斑点中全血浆铜蓝蛋白浓度的方法,包括:
制造血浆铜蓝蛋白特异性多克隆抗体的步骤;
制造血浆铜蓝蛋白特异性单克隆抗体的步骤;
将上述血浆铜蓝蛋白特异性多克隆抗体和血浆铜蓝蛋白特异性多克隆抗体与辣根过氧化物酶偶联的步骤;
制造除去血浆铜蓝蛋白的血液,在此血液里添加一定浓度的包含精制血浆铜蓝蛋白的溶液,制造标准血液斑点和对照血液斑点的步骤;
利用上述血浆铜蓝蛋白特异性多克隆抗体和血浆铜蓝蛋白特异性多克隆抗体,根据标准血液斑点和对照血液斑点,通过酶联免疫吸附测定法制定吸光度标准曲线的步骤;和
利用上述标准曲线,从病人的血液斑点中,测定全血浆铜蓝蛋白浓度的步骤。
11.一种利用解离强化的时间分辨荧光免疫测定法测定血液斑点中全血浆铜蓝蛋白浓度的方法,包括:
制造血浆铜蓝蛋白特异性多克隆抗体的步骤;
制造血浆铜蓝蛋白特异性单克隆抗体的步骤;
对上述血浆铜蓝蛋白特异性多克隆抗体和血浆铜蓝蛋白特异性多克隆抗体标记铕的步骤;
制造除去血浆铜蓝蛋白的血液,在此血液里添加一定浓度的包含精制血浆铜蓝蛋白溶液,制造标准血液斑点和对照血液斑点的步骤;
利用上述血浆铜蓝蛋白特异性多克隆抗体和血浆铜蓝蛋白特异性多克隆抗体,根据标准血液斑点和对照血液斑点,通过解离强化的时间分辨荧光免疫测定法制定标准浓度曲线的步骤;和
利用上述标准浓度曲线,从病人的血液斑点中,测定全血浆铜蓝蛋白浓度的步骤。
12.权利要求10或11所述的血液斑点中测定全血浆铜蓝蛋白浓度的方法,其中,上述病人为肝豆状核变性病患者。
13.权利要求10或11所述的方法,其中,上述制造除去血浆铜蓝蛋白的血液的步骤,使用磷酸缓冲液。
14.权利要求10或11所述的方法,其中,上述制造标准血液斑点和对照血液斑点是通过在除去血浆铜蓝蛋白的血液里添加已知浓度的血浆铜蓝蛋白溶液而制造。
15.权利要求10或11所述的方法,其中,上述血液里添加的已知浓度的血浆铜蓝蛋白溶液为3种以上。
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