[发明专利]重组葡激酶(126)的制备方法

说明书

                             技术领域

本发明涉及一种重组葡激酶(126)的制备方法，属于生物工程技术领域。

                             背景技术

心脑血管疾病是一种普遍的多发病，危害性极大。

葡激酶Sak是来源于金黄色葡萄球菌的一种非酶蛋白。它象链激酶SK一样，与纤溶酶原结合形成复合物，去催化纤溶酶原转化为纤溶酶，然后对血纤维蛋白进行水解。Sak优先选择与血栓上的纤溶酶原结合，水解其中的血纤维蛋白，当血浆中不存在血栓时，血纤维蛋白溶酶则被血浆中的(α-AP)中和，不降低凝血系统中的纤维蛋白原，不易引起全身性溶血。具有分子量小、渗透性好、溶栓速度快、副作用小等特点。用于心肌梗塞、脑栓塞、肺栓塞等疾病的治疗。

成熟的葡激酶分子中含有136个氨基酸，肽链中没有二硫键，对溶液中成熟葡激酶分子构象研究表明，分子中有两个相似大小的结构域，中心距为3.7nm，分子形状类似一个易变的“哑铃”。葡激酶在分离过程中经常以三种形式存在：成熟SaK，成熟SaK分子N-末端降解6个和10个氨基酸的产物，即Sak-M、SaK-Δ6和Sak-Δ10，Sak-ΔN10分子量更低，在与纤溶酶原作用过程中，效果更好。

已有药理试验表明，曾对100名急性心肌梗塞病人的临床试验中(52名患者使用r-tPA；48名患者使用r-SAK，其中25名10mg，23名20mg剂量)，比较了r-Sak两个剂量(10mg和20mg)，20分钟一次性滴注给药与r-tPA(商品名Alteplase)治疗效果。实验结果表明，r-Sak动脉早期开通作用明显。从开通的程度比较：r-Sak最适剂量20mg，90分钟内TIMI-3开通率较r-tPA高。另一项在30名外周动脉栓塞患者使用体内导管引导法进行r-Sak给药，对r-Sak的溶栓效应，安全性及纤维蛋白专一性和在病人体内的免疫原性进行了研究。结果表明，r-Sak的溶栓有效性及动脉再通的结果非常好，r-Sak具有明显的纤维蛋白专一性。生产重组葡激酶(126)，市场前景广阔。

                             发明内容

本发明所要解决的技术问题是：提供一种简单易行，操作方便，能获得高纯度产品，生产周期短，效率高，可实现大规模工业化生产制备葡激酶(126)的制备方法。

本发明所述的重组葡激酶(126)，其基因全DNA序列及其编码的氨基酸为：

AAG   GGC   GAT   GAC   GCG   AGT   TAT   TTT   GAA   CCA

 Lys  Gly   Asp   Asp   Ala   Ser   Tyr   Phe   Glu   Pro

ACA   GGC   CCG   TAT   TTG   ATG   GTA   AAT   GTG   ACT

 Thr  Gly   Pro   Tyr   Leu   Met   Val   Asn   Val   Thr

GGA   GTT   GAT   GGT   AAG   GGA   AAT   GAA   TTG   CTA

 Gly  Val   Asp   Gly   Lys   Gly   Asn   Glu   Leu   Leu

TCC   CCT   CGT   TAT   GTC   GAG   TTT   CCT   ATT   AAA

 Ser  Pro   Arg   Tyr   Val   Glu   Phe   Pro   Ile   Lys

CCT   GGG   ACT   ACA   CTT   ACA   AAA   GAA   AAA   ATT

 Pro  Gly   Thr   Thr   Leu   Thr   Lys   Glu   Lys   Ile

GAA   TAC   TAT   GTC   GAA   TGG   GCA   TTA   GAT   GCG

 Glu  Tyr   Tyr   Val   Glu   Trp   Ala   Leu   Asp   Ala

ACA   GCA   TAT   AAA   GAG   TTT   AGA   GTA   GTT   GAA