[发明专利]植物克隆脱毒快速繁殖技术

说明书

技术领域

本发明涉及植物的繁殖培育方法，尤指一种以克隆方式繁殖植物的方法。

背景技术

植物克隆是从二十世纪三十年代初期发展起来的一项生物技术，它是在人工配制的培养基上，于无菌状态下培养植物器官、组织、细胞，原生质体等材料的方法，即从细胞的一部分，甚至没有细胞壁的裸露的原生质体中再生出无数的小植株，不同的植物它的培养基质不同，所有的大量元素及微量元素也不同，目前国际上研究出的品种已达数百种之多。

利用克隆技术可实现优良无性系或单株迅速繁殖推广，并且不改变其遗传性，即保持原有的优良性不变。比如，1个兰花茎尖经过一年克隆繁殖可以获得400万株具有相同遗传性的健康植株，这是其他任何方法都难以实现的。又如花叶芋这种植物，常规繁殖每年仅几倍到几十倍，克隆技术每年可繁殖出几万至数百万倍的小植株。这种繁殖速度对于珍贵、优、新植物品种是非常有意义的。尤其是在市场竞争激烈的今天，在短时间内获得大量商品价格较高的苗木，无疑将会给生产者带来巨额利润。

植物克隆技术虽然具有上述的诸多优点，但实施上却有一些技术困难点，比如如果克隆母植物带有病原菌(真菌、细菌、或病毒)，则克隆出来的植物同样带有这些病原菌，会使植株生长不旺或夭折；另外克隆试管苗移植入土壤如果方法不正确，也会对植物造成损伤甚至导致死亡。

发明内容

为解决目前植物克隆技术未根除病原菌以及克隆试管苗移植入土壤如果方法不当造成植物损伤甚至导致死亡的技术问题，本发明提供一植物克隆脱毒繁殖方法的技术，该方法在植物克隆时增加灭菌程序，并提供移植维护措施，可使克隆出来的植物更加健壮旺盛，移载成活率大幅提高。

本发明的技术方案是：一种植物克隆脱毒繁殖技术，包括如下步骤：

h.配制培养基；

i.选择健壮无病虫母株；

j.接种前进行表面灭菌；

k.实施接种；

l.放到培养室培养；

m.移载到移植基质中驯化培养；

n.栽植于土壤中。

在本发明的步骤a中是选择配制应用最多的MS培养基，其组成是在配制1升(1000毫升)培养基时，加硝酸铵1.65±0.01克、硝酸钾1.9±0.1克、氯化钙0.44±0.01克、硫酸镁0.37±0.01克、磷酸二氢钾0.17±0.01克、碘化钾0.83±0.01毫克、硼酸5.2±0.1毫克、硫酸镁22.3±0.1毫克、硫酸锌3.6±0.1毫克、钼酸钠0.25±0.01毫克、硫酸铜0.025±0.001毫克、氯化钴0.025±0.001毫克、硫酸铁27.8±0.1毫克、蔗糖30±5克和琼脂7±5克，其余为水，其他生长调节物质要根据植物的种类和培养目的而确定。

步骤c中的灭菌的具体操作方法是先用自来水冲洗十几分钟，有泥的应刷去。冲洗干净后，用70％的酒精浸泡10～15秒钟消毒；接着用无菌水(经高压灭菌的蒸馏水)冲洗两次，再用10％的漂白粉澄清液浸泡20分钟消毒，最后用无菌水冲洗3～4次，带有茸毛不易湿润消毒的材料可加些洗衣粉；上述操作皆应在接种箱或超净工作台等无菌环境条件进行。

步骤d的接种操作中先用解剖刀切取所需部位，通常几毫米大小，培育无病毒苗则应在1毫米以下，然后用解剖针或枪式镊子将材料接种到培养瓶上培养。工具用完即应在95％酒精中蘸一下，或用火焰消毒法消毒，避免工具带菌造成交叉污染，操作时应穿工作服、戴工作帽，事先洗净手，后再用酒精棉擦拭一遍。

步骤e的培养室培养是将植物材料接种后放到培养室培养，培养室是花卉材料培养生长的场所，培养时的照度约为3000勒克斯，培养室的温度采取昼夜恒温培养，保持在25℃±2℃，也有采取昼夜变温培养的，夜晚温度可低些，每天日光灯照明12-16小时。

步骤f移载到移植基质中驯化培养的操作是在克隆试管苗开始移出时，仍罩上玻璃瓶，或盖上薄膜袋，上开几个小孔，1周后去掉，有喷雾条件则更理想，开始7-10天要遮荫，以后逐渐见阳光，移植基质为沙与蛭石各半，要排水、通风，隔一天浇一次营养液，2-3周后经驯化锻炼苗即可移至培养土中栽植。