[发明专利]色谱检定片及其制造方法

说明书

                      技术领域

本发明涉及一种定性或定量分析液体试样用的色谱检定片及其制造方法，尤其涉及使液体试样在检定片上均匀展开的色谱检定片及其制造方法。

                      背景技术

迄今，利用抗原抗体反应、酶反应的色谱检定法正被广泛用作实施水质检测、尿液检查等液体试样的化验或临床检查的方法。通常所谓色谱(或层析)法，是指按其构成成分分离混合物的方法。

图8示出迄今借助色谱法测定中使用的色谱检定片。

图8中的色谱检定片100具有：支承色谱材料的反应层承载基片101、添加液体试样的试样添加部位102、保持可借液体试样的浸渍而移动的标识试剂的标识物保持部位103、具有与分析对象(含在流动的液体试样中)发生特异性结合的物质的标识试剂和分析对象起结合反应的反应层104、起特异性结合反应(在反应层104的区域，就反应形式来讲，与诸如抗体或抗原的分析对象起特异性结合反应)而使特异性蛋白固定化的特异性蛋白固定化部位105、以及吸收流动的液体试样的吸水部位106。

下面，就迄今借助色谱检定片100的测定方法进行说明。

当液体试样添加在试样添加部位102时，该液体试样就渗进试样添加部位102，达到标识物保持部位103。接着，保持在标识物保持部位103区域的标识试剂借助液体试样的渗透而溶解，与液体试样一起渗进反应层104。在反应层104区域上有特异性蛋白质固定化的特异性蛋白固定化部位105，当上述液体试样含有分析对象时，该特异性蛋白质与分析对象-标识试剂复合体起抗原抗体反应，在特异性蛋白固定化部位105区域可见某些显色反应。用目测法或检测装置测定该显色反应。而当液体试样不含分析对象时，就不起抗原抗体反应，也不见显色反应。然后，液体试样最终被吸水部位106吸收，反应结束。如上所述，借助色谱检定片的测定方法，检定结果(显色反应)极易判定，应用范围广，能适合于各种分析对象的检定。但是，借助色谱检定片的测定是使液体试样在上述检定片上展开、确认显色反应，所以为得到正确的测定结果，该检定片上的液体试样必须有比较均匀的展开形状。而且由于液体试样的展开速度会影响反应层104中标识试剂与该液体试样的反应，所以也需要提高液体试样对该反应层104的渗透性。

作为色谱检定片迄今的例子，可以举出例如特开昭62-71861和特开平11-153601号公报。

在特开昭62-71861中公开了在用免疫原理的测定中添加亲水亲油平衡(HLB)值大于20的表面活性剂来促进反应从而迅速检出分析对象的方法，而且，特开平11-153601中公开了在试样添加部位至反应层之间设置一个保持表面活性剂等的添加剂浸渍部位，防止底色着色、空白发生的信噪(S/N)比降低和误动作从而正确、迅速地检出分析对象的方法。

但是，迄今为止，由于色谱检定片没有机械上控制液体试样的渗透速度的手段，所以不能人为地控制渗透速度，液体试样的渗透速度不得不受检定片的渗透性左右。因此，液体试样渗透检定片需要很长时间，且向反应层104的渗透不均匀，在特异性蛋白固定化部位105等的反应成分固定化部位上产生一些未渗透区，导致测定的正确性不足。解决的办法是用表面活性剂处理色谱检定片，设法提高其渗透性，但在上述表面活性剂处理中所用的表面活性剂本来是液态或糊状的，让它干燥到绝干状态是不可能的。由此，在色谱检定片的保存期间出现了诸如固定化抗体渐渐失活、检定片的性能恶化、品质保持期缩短或保管条件受到限制等问题。

再者，色谱测定是在检定片上添加液体试样后经过一定时间起显色反应的显色区域上进行的，因此，用表面活性剂处理检定片时，标识试剂与反应层104发生非特异性吸附而作为底色残留在反应层上，用检测仪测定该显色区域时，此底色值给显色度带来误差，发生定量性能降低的问题。而且，用目测法判断显色反应时，底色的显色使显色状况的判断发生错误。

再者，采用特开昭62-71861中公开的方法时，检定片的渗透性和渗透速度确因HLB值大于20的表面活性剂的添加而得到提高，但由于其渗透速度过快，测定所需的反应进行得不充分，发生了测定正确性不足的问题。

再者，特开平11-153601中公开了用表面活性剂浸渍检定片上反应层以前的部位，特异性蛋白固定化部位等的反应成分固定化部位上没有表面活性剂，所以减轻底色的影响且检定片的反应成分不致失活或变性。但是，在渗透过程中，由于试样没有充分渗透到固定化区域中的反应成分中而使反应不均匀，导致其测定的正确性不足。