[发明专利]含有携带剪接受体的基因工程细胞非编码序列的高效逆转录病毒载体

权利要求书

1.一种来源于鼠白血病病毒(MLV)载体的逆转录病毒载体，包括

1)插入多克隆位点上游的，作为来源于外源基因的非编码序列的延伸因子EF1α的非编码序列的一部分，和

2)一种导入到EF1α的非编码序列中的剪接受体下游的突变，所述逆转录病毒载体没有病毒编码序列。

2.权利要求1的逆转录病毒载体，其中EF1α的非编码序列是刚好就在翻译起始密码子之前的人EF1α的内含子和外显子2的序列。

3.权利要求2的逆转录病毒载体，其中EF1α的非编码序列具有SEQ IDNO.1的核苷酸序列。

4.权利要求1的逆转录病毒载体，其中的突变导入到该剪接受体下游的SEQ ID NO.1的第205位和第206位的GT(鸟嘌呤-胸腺嘧啶)位点。

5.权利要求4的逆转录病毒载体，其中GT碱基对用CC(胞嘧啶-胞嘧啶)碱基对取代。

6.权利要求1的逆转录病毒载体，它包括：

1)来源于起始的MLV载体的核苷酸序列，其是5’LTR，包含在起始的gag基因的上游的剪接供体的最小包装序列，多嘌呤示踪，和3’LTR；

2)多克隆位点；

3)EF1α的核苷酸序列的一部分，从内含子3’末端开始到刚好就在外显子2的翻译起始密码子之前，其被插入到该最小包装序列和该多克隆位点之间；和

4)在该多克隆位点下游的一种SV40最小启动子或一种内部核糖体进入位点(IRES)。

7.权利要求1至6之一的逆转录病毒载体，其中该起始的MLV载体的5’LTR中的U3或其部分被作为外源启动子的HCMV IE(人巨细胞病毒立即早期)启动子所取代。

8.权利要求6的逆转录病毒载体，它进一步包括NEO或MDR基因作为可筛选的标记基因。

9.权利要求1的逆转录病毒载体，它是载体MT5，包括

1)来源于起始MLV载体的核苷酸序列，其为5’LTR，含有起始的gag基因的上游的剪接供体的最小包装序列，多嘌呤示踪，和3’LTR；

2)多克隆位点；

3)一部分的EF1α核苷酸序列，它从内含子的3’末端开始到刚好就在外显子2的翻译起始密码子之前，被插入到该最小包装序列和该多克隆位点之间；

4)在多克隆位点下游的一种内部核糖体进入位点(IRES)；和

5)在该剪接受体下游，取代在+977～+978位点上的GT碱基对的CC碱基对。

10.用权利要求9的载体MT5转化的大肠杆菌菌株MT5(JM)(保藏号KCCM-10205)。

11.权利要求8的逆转录病毒载体，它是载体MTM5，包括

1)来源于起始的MLV载体的核苷酸序列，其为5’LTR，含有起始的gag基因的上游的剪接供体的最小包装序列，多嘌呤示踪、和3’LTR；

2)多克隆位点；

3)一部分的EF1α核苷酸序列，它从内含子的3’末端开始到刚好就在外显子2的翻译起始密码子之前，被插入到该最小包装序列和该多克隆位点之间；

4)在该多克隆位点下游的一种内部核糖体进入位点(IRES)；和

5)在剪接受体下游，在+977～+978位点上的取代该GT碱基对的CC碱基对；和

6)作为可筛选的标记基因的MDR基因。