[发明专利]微生物酶法制备D－泛醇的方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生物酶法制备D-泛醇的方法，具体地说涉及利用串珠镰孢霉菌(Fusarium moniliforme)SW-902 CGMCC No.0536发酵产酶并进行酶水解拆分制造D-泛解酸内酯，再与β-氨基丙醇反应生产D-泛醇的方法。

背景技术

D-泛酸，又称本多生酸、维生素B₅或B₃，是一种重要的药物、食品添加剂和饲料添加剂。人类及动物对D-泛酸有生理上的需求，而D-泛酸极不稳定，其商品形式为D-泛酸钙，但D-泛酸钙是固体，应用范围受到限制，而D-泛醇，又称维生素原B5，是以液体形式存在的D-泛酸钙的同效物，能弥补D-泛酸钙的应用领域的不足，D-泛醇进入人体内能转化为泛酸，进而合成辅酶A，促进人体蛋白质、脂肪、糖类的代谢，保护皮肤表面的粘膜和毛发光泽，防止疾病的发生，因此，D-泛醇作为营养补剂，特别适用于医药、食品、化妆品行业，如口服液、眼药水、复合VB针剂、洗发水、摩丝、润肤霜等。

D-泛醇(维生素原B5)，又是重要的化妆品和药用原料，市场紧缺。D-泛醇的生产不能采用钙盐诱导结晶法，合成D-泛醇的中间体泛解酸内酯要求具有较高的光学纯度。

目前市场供应的D-泛醇产品全都采用化学法拆分D-泛解酸内酯制备。化学法制备泛解酸内酯用手性胺、奎宁化合物、二甲马钱子碱和氯霉氨等拆分剂拆分，其最大的问题是操作步骤多，产品精制麻烦，产品中有可能带有对人和动物健康不利的化学药剂、溶剂等杂质。还有拆分剂回收率低，导致了大量的拆分剂，例如氯霉氨，进入废水，使废水中氯霉氨占了废水总量的70％～80％，引起废水处理量大，易造成环境污染。

日本第一制药公司生产D-泛解酸内酯虽然采用了微生物酶生产法，但并未见有关其合成D-泛醇的报道。

发明内容

本发明的目的提供一种直接用微生物酶法制备D-泛醇的方法，即利用高产D-泛解酸内酯水解酶的微生物菌株，酶法拆分DL-泛解酸内酯，所得到的酶水解产物中D-泛解酸内酯的光学纯度达到99％e.e.以上，再与β-氨基丙醇反应生产高光学纯度D-泛醇的方法。

附图说明

附图1为本发明的工艺流程示意图。

本发明通过下列方案来实现：

(1)本发明采用高产D-泛解酸内酯水解酶的微生物菌株串珠镰孢霉菌(Fusarium moniliforme)SW-902 CGMCC No.0536(此菌株已于2001年2月12日保存在中国北京中关村中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物保藏中心)，发酵产酶，以化学合成的DL-泛解酸内酯，精制后作为酶转化底物，酶转化生成D-泛解酸，经内酯化，溶剂萃取、脱色、浓缩、结晶，制成D-泛解酸内酯；

(2)将D-泛解酸内酯与β-氨基丙醇以等摩尔浓度在一定的溶剂和20～80℃温度条件下反应2～40小时，经分离、提纯，得到高光学纯度的D-泛醇。

本发明采用的微生物酶水解制造D-泛解酸内酯与β-氨基丙醇反应生产D-泛醇的方法克服了诱导结晶法拆分DL-泛酸钙不能用于D-泛醇生产的缺点，克服了化学拆分法拆分剂贵，成本高，分离困难，有污染和毒性等问题。本发明的优点是成本低、工艺简单易控制、反应条件温和、产品安全质量好、对环境无害等优点。具体实施方式  

下面通过具体的实施方案对本发明作详细说明。

实施例1

斜面培养：培养基为马铃薯浸汁(20％)100ml，葡萄糖2g，琼脂2g，pH6.5，121℃灭菌20分钟，灭菌后冷却接种，菌种为串珠镰孢霉菌(Fusariummoniliforme)SW-902 CGMCC No.0536，在25℃培养5～7天，作为斜面活化种子。

产酶培养：培养基为丙三醇3％，蛋白胨0.5％，酵母膏0.5％，玉米浆0.5％，pH6.0，装液量为500ml三角瓶装液100ml，121℃灭菌20分钟，灭菌后冷却接种斜面种子，28℃培养1～5天，发酵液过滤或离心，得到的湿菌体(D-泛解酸内酯水解酶)，作为酶源。

由化学合成制备的DL-泛解酸内酯，用含50mmolCaCl₂的水溶液配制成30％浓度为底物；加酶量为0.3U/g泛解酸内酯，置摇床28℃，150r/min反应，每20分钟取样进行高压液相色谱分析，并用浓氨水调节反应液的pH值为7.0。酶解时间为5～10小时。得到的酶水解液萃取分离后，经内酯化的产品D-泛解酸内酯的比旋光度为[α]_D²⁰＝-49°。

实施例2

在反应器内，加入无水甲醇2,000Kg，β-氨基丙醇750Kg，启动搅拌，投入按实例1方法得到的D-泛解酸内酯1,300Kg，保持40～50℃，反应24hr，减压浓缩至无甲醇蒸出为止，出料，得到无色透明粘稠液体D-泛醇2,051Kg，对投入D-泛解酸内酯的mol收率为99.93％，测定比旋光度为[α]_D²⁰＝+30.1°。