[发明专利]高纯度紫丹参甲素的制备方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种从天然产物中分离制备高纯度的紫丹参甲素(Przewaquinone A，Przewatanshinquinone A)的方法。

背景技术：

目前报道含有紫丹参甲素的天然产物主要是丹参或紫丹参。药理研究表明，紫丹参甲素具有明显的抗肿瘤活性：对小鼠Lewis肺癌、黑色素瘤₁₃₁₆和肉瘤₁₈₀有不同程度的抑制作用。

紫丹参甲素的制备工艺在文献中报道的非常少，且很不成熟。高速逆流色谱(High-speed Countercurrent Chromatography，HSCCC)是近年发展起来的一种连续的无需固体支撑物的高效、快速的液液分配色谱分离技术，具有分离量大、样品无损失、回收率高、分离环境缓和、节约溶剂等特点，已广泛应用于生物、医药、环保等领域化学物质的制备分离和纯化。

发明目的：

本发明的目的是提出一种采用高速逆流色谱法可克量级制备紫丹参甲素的工艺，制备的紫丹参甲素纯度可达98％以上。

技术内容：

本发明的基本工艺路线是：

(1)用有机溶剂浸提含有紫丹参甲素的天然产物，得到其提取物；

(2)将所得提取物用柱色谱层析法进行提纯，收集含紫丹参甲素的组分，

   蒸干溶剂；

(3)将(2)所得样品用高速逆流色谱法分离制得纯度高于98％的紫丹参甲

   素产品。

柱色谱层析采用的固定相为硅胶(颗粒度为10-500目)；流动相可选不同比例的二元混合液：A组分可选自氯仿、二氯甲烷、四氯化碳等卤代烃；B组分可选自乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸异丙酯、乙酸正丁酯等脂肪酯类，优选氯仿-乙酸乙酯体系。A与B的体积比为1-10∶1。

高速逆流色谱法对紫丹参甲素精制溶剂体系主要有三个。均以上相为固定相，下相为流动相。一号溶剂体系由三个组分构成，A组分可选自氯仿、二氯甲烷、四氯化碳等卤代烃，B组分可选自甲醇、乙醇、丙醇、丙酮等脂肪醇或脂肪酮，C组分为水，优选氯仿-甲醇-水体系，A、B、C的体积比为2-6∶2-6∶1-4。二号溶剂体系由四个组分构成，A组分可选自氯仿、二氯甲烷、四氯化碳等卤代烃，B组分可选自甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丙酮等脂肪醇或脂肪酮，C组分可选自正己烷、石油醚、环己烷等烷烃或醚类，D组分为水，优选氯仿-甲醇-正己烷-水体系，A、B、C、D的体积比为2-5∶2-5∶1-4∶1-4。三号溶剂体系由五个组分构成，A、C组分可选自氯仿、二氯甲烷、四氯化碳等卤代烃，B组分可选自甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丙酮等脂肪醇或脂肪酮，D组分可选自正己烷、石油醚、环己烷等烷烃或醚类，E组分为水，优选四氯化碳-甲醇-二氯甲烷-正己烷-水体系，A、B、C、D、E的体积比为0.5-3∶2-5∶0.5-3∶1-4∶1-4。

实验适合于在室温为15℃-30℃下进行。

优点及效果：

用本法制备的紫丹参甲素纯度可达到98％以上。本法适用于以各种含紫丹参甲素的天然产物、天然产物的提取物为原料制备高纯度的紫丹参甲素。适用于采用各种型号的逆流色谱仪分离制备紫丹参甲素。本发明率先提出了一种可克量级制备紫丹参甲素的工艺，本工艺具有分离量大、样品无损失、回收率高、分离环境缓和、节约溶剂等特点。

实施例1

采用氯仿-甲醇-正己烷-水体系制备纯度高于98％的紫丹参甲素：首先用石油醚浸提丹参，减压蒸干溶剂，用硅胶柱对3g丹参提取物进行分离，洗脱剂比例为9∶1的氯仿-乙酸乙酯溶液，分步收集，将含有紫丹参甲素的溶剂减压浓缩至干，得到初步纯化产物。使用半制备型高速逆流色谱仪，配有NS-1007泵，20ml进样阀，聚四氟乙烯柱，柱容积为240ml，8823A-UV紫外检测器，Yokogawa3057便携式记录仪。进样前，先用固定相充满整个柱子，调整主机转速为800rpm，以2.0ml/min的流速将流动相泵入柱内，待整个体系建立动态平衡后，由进样阀进样，然后根据检测器紫外谱图，接收目标成分。溶剂体系的制备：将体积比为2.8∶3∶1.2∶2的氯仿-甲醇-正己烷-水混溶于分液漏斗中，摇匀后静置分层，取其上层溶液(上相)为固定相，下层溶液(下相)为流动相。用1∶1的上相和下相混合液20ml溶解初步纯化样品进行分离，收集紫丹参甲素的组分峰，旋转蒸发至干，得到红色紫丹参甲素固体，经HPLC分析，其纯度达到98％以上。

实施例2