[发明专利]具有肿瘤细胞特异性感染和转基因表达能力的新型腺病毒

权利要求书

1、一种至少缺少E1和/或者E3基因的重组腺病毒载体，含有：

a)外源DNA序列

b)一对反向重复序列，连接于外源DNA序列序列两侧；

所述的反向重复序列在两个相同腺病毒载体的反向重复序列之间介导相互的同源重组。

2、一种获得解离的重组腺病毒载体的方法，包括：在适合的环境条件下，将至少两个权利要求1所述的亲本重组腺病毒载体导入一个复制活性细胞中，这样两个载体在转导的复制活性细胞中可以发生同源重组，进而生成解离的重组腺病毒载体。

3、通过权利要求2所述的方法产生的解离的重组腺病毒载体。

4、一种至少缺少E1和/或者E3基因的重组腺病毒载体，含有：编码一个目标基因的DNA序列的第一段部分，这个DNA序列与在另一个重组腺病毒载体中编码同一个目标基因的DNA序列的第二段部分发生同源重组，重组后形成一个完整的基因，它可以表达目的蛋白。其中，第二个DNA序列与第一个序列有部分的重叠区，在这个重叠区域两个DNA片断发生同源重组。

5、一种获得解离的重组腺病毒载体的方法，包括：在适合的环境条件下，将至少两个权利要求4所述的亲本重组腺病毒载体导入一个复制活性细胞中，这样两个载体在转导的复制活性细胞中可以发生同源重组，进而生成解离的重组腺病毒载体。

6、通过权利要求5所述的方法产生的解离的重组腺病毒载体。

7、权利要求2或5中所述的方法，其中所述的复制活性细胞是肿瘤细胞。

8、一个重组腺病毒载体，由两条反向平行的DNA链组成，其中第一条链的组成如下：

a)腺病毒左端反向末端重复序列；

b)位于左端反向末端重复序列的3｀端的腺病毒包装序列；

c)位于腺病毒包装序列3｀端的启动子序列；

d)第一反向重复序列，位于启动子序列3｀端；

e)位于第一个反向重复序列3｀端的外源DNA序列，方向是由3｀端到5｀端；

f)第二反向重复序列，位于外源序列(e)的5｀端；

g)负责腺病毒在被转导细胞中复制的一个或者几个基因，它(它们)位于第二个反向重复序列的3｀端；

h)腺病毒右端反向末端重复序列，它位于被转导细胞中负责腺病毒复制的基因的3｀端；

第二条链选择性地包含编码腺病毒纤维蛋白的序列，该蛋白使得所述的腺病毒载体靶向特定的宿主细胞。

9、权利要求8中的重组腺病毒载体，进一步包含一个位于第一个反向重复序列3｀端的双向转录终止位点序列。

10、权利要求8中的腺病毒载体，其中启动子具有肿瘤特异性。

11、权利要求8中的腺病毒载体，其中肿瘤特异启动子是劳氏肉瘤(Rous Sarcoma)病毒启动子序列。

12、权利要求9中的腺病毒载体，其中终止位点是一个SV40病毒的双向多聚腺苷序列。

13、权利要求8中的腺病毒载体，其中终止位点是一个合成的双向多聚腺苷序列终止位点。

14、权利要求8中的腺病毒载体，其中在外源DNA序列两侧的成对的反向重复序列是相同的序列。

15、权利要求8中的腺病毒载体，其中在外源DNA两侧的反向重复序列是可切割的。

16、权利要求8中的腺病毒载体，其中在外源DNA序列两侧的反向重复序列是一个β-球蛋白内含子序列，不含任何转录及翻译终止位点。

17、权利要求15中的腺病毒载体，其中在外源DNA序列两侧的反向重复序列是提供和接收结合位点的拷贝。

18、权利要求8中的腺病毒载体，其中外源DNA序列表达一个或多个基因产物，包括治疗基因，选择基因和/或报告基因。

19、权利要求18中的腺病毒载体，其中的基因是治疗基因，包括细胞凋亡基因，细胞裂解基因，自杀基因，显性负性I-k-β，胱天蛋白酶，γ球蛋白、人α-1抗胰蛋白酶基因。

20、权利要求18中的腺病毒载体，其中的基因是选择基因，包括新霉素、氨苄青霉素、青霉素、四环素、庆大霉素基因。