[发明专利]一种新型体内核酸转染试剂

说明书

技术领域：

本发明涉及杭核酸DNA的体内转染试剂，特别是公开了一种新型体内核酸转染试剂，属于DNA免疫、基因治疗和反义寡聚核苷酸药物的体内导入技术领域。

背景技术：

目前DNA的体内导入有多种方法，但大多价格昂贵或转染效率不高。DNA进入细胞的效率低是制约基因治疗和基因免疫技术进一步发展的瓶颈之一。现有的一些提高目的DNA进入细胞核的技术，仍存在着这样或那样的缺陷。利用病毒载体进行介导转染，则存在整合复性的可能以及可使宿主产生免疫反应等潜在的不安全性等问题；脂质体和阳离子多聚物如：聚乙烯亚胺等(PEI)介导的基因转移是目前应用较多的体内基因转移技术。其中脂质体以转移效率相对较高，毒性小而应用最为广泛，但其成本昂贵(1200-3000元/ml)而使其应用受到一定的限制。PEI与脂质体相比较而言，其转移效率要低，但因其价格低廉，其应用仍然较多，如何提高其转移效率亦是许多科研工作者努力的方向之一。

发明内容：

本发明公开一种新型体内核酸转染试剂，解决了DNA的体内导入转染剂成本昂贵及转染效率不高的问题。

本发明的技术解决方案如下：

本发明的体内核酸转染剂是由下列物质按重量份数比制成的试剂：

司苯2.5～3.5％、甘油0.6～0.8％。

以无菌蒸馏水配制2.5～3.5％、司苯和0.6～0.8％的甘油，将此混合液装于适当的容器中，于37℃～50℃以200～300转/分的速度进行剧烈振荡4～5小时，此时混合液变成均匀的悬浊液。此悬浊液即为核酸转染试剂。使用时将核酸溶液与此试剂按一定的比例混合，于旋涡器上振荡一分钟即可，司苯的终浓度在0.1～0.8％之间均有效。

本发明的积极效果在于：将此体内转染试剂与目前转染效果最好的脂质体和应用较为普遍的PEI的转染效率进行了比较。本发明的转染试剂的转染效率与脂质体未明显的差异，但明显高于PEI的转染效率。在三者所介导的狂犬病基因疫苗试验中，试验小鼠的攻毒保护率分别是：脂质体78.4％；本转染试剂71.6％；PEI 33.3％。该转染试剂放置4℃ 2个月质量保持稳定。

具体实施方式：

实施例1：以无菌蒸馏水配制100ml 3％司苯和0.7％的甘油，将此混合液装于1000ml的三角烧瓶，于37℃以300转/分的速度进行剧烈振荡4小时，此时混合液变成均匀的悬浊液。此悬浊液即为核酸转染试剂。使用时将核酸溶液与此试剂按一定的比例混合，于旋涡器上振荡一分钟即可，司苯的终浓度在0.1～0.8％之间均有效。

实施例2以无菌蒸馏水配制50ml 3.5％司苯和0.8％的甘油，将此混合液装于500ml的三角烧瓶，于40℃以250转/分的速度进行剧烈振荡4.5小时，此时混合液变成均匀的悬浊液。此悬浊液即为核酸转染试剂。使用时将核酸溶液与此试剂按一定的比例混合，于旋涡器上振荡一分钟即可，司苯的终浓度在0.1～0.8％之间均有效。

实施例3以无菌蒸馏水配制100ml 2.5％司苯和0.6％的甘油，将此混合液装于1000ml的三角烧瓶，于37℃以200转/分的速度进行剧烈振荡5小时，此时混合液变成均匀的悬浊液。此悬浊液即为核酸转染试剂。使用时将核酸溶液与此试剂按一定的比例混合，于旋涡器上振荡一分钟即可，司苯的终浓度在0.1～0.8％之间均有效。