[发明专利]人类tonB依赖的受体蛋白编码序列、其制备方法及用途

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体地，本发明涉及一种新的人基因核苷酸序列。更具体地说，本发明涉及人类新型tonB依赖的受体蛋白的cDNA序列以及该序列编码的多肽。本发明还涉及所述多核苷酸序列和所述多肽的生产方法，以及这些多核苷酸和所述多肽的用途。

背景技术

物质进出细胞必须通过细胞膜，细胞膜的特殊结构决定了不同物质通过细胞的难易程度不同。物质通过细胞膜的转运有以下几种形式：

(一)  被动转运：包括单纯扩散和易化扩散两种形式，主要用于运送小分子。

(二)  主动转运，包括原发性主动转运和继发性主动转运。主动转运是指细胞消耗能量将物质由膜的低浓度一侧向高浓度的一侧转运的过程。最常见的离子泵转运为细胞膜上的钠泵(Na+-K+泵)。

(三)  出胞和入胞作用。出胞是指某些大分子物质或物质团块由细胞排出的过程，主要见于细胞的分泌活动。入胞则指细胞外的某些物质团块进入细胞的过程。因特异性分子与细胞膜外的受体结合并在该处引起的入胞作用称为受体介导式入胞。

TonB是众多参与物质跨细胞膜转运的蛋白之一，它涉及通过受体依赖的需能转运方式将物质运输到细胞外的过程。它与细胞质膜中提供能量的代谢耦联，从而为该转运过程提供能量(Braun V，Gunter K，Hantke K.1991，Biol Met；4(1)：14-22)。TonB被认为与细胞质膜和外膜有强烈的相互作用。在大肠杆菌中，tonB蛋白与其他外膜受体相互作用，将高亲和力和需能的特异性底物运送往膜周空间。这些底物或是很难通过多孔通道，或是浓度很低，在tonB缺失的条件下，这些物质与其受体结合但不进行转运。研究表明，大肠杆菌的Tonb蛋白与质膜质子动力耦联可以激活含铁细胞离子复合物和维生素B12转运通过外膜(Higgs PI，Letain TE，Merriam KK，Burke NS，Park H，Kang C，Postle K.2002，J Bacteriol；184(6)：1640-8)。

TonB依赖的受体蛋白是一个大家族。研究表明，TonB依赖的受体蛋白主要参与转运细胞生长所必需的离子，尤其是铁离子。近年来发现的有：btuB，用于转运钴胺素的受体；cirA，用于转运大肠杆菌素的受体；fcuA，在Yersinia enterocolitica中转运铁色素的受体；fhuA，用于转运铁色素离子的受体；hemR在Yersinia enterocolitica中运送高铁血红素的受体；等等。然而，在本申请之前，还没有人公开或发表过本发明的tonB依赖的受体蛋白家族新成员。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种新的多核苷酸，该多核苷酸编码tonB依赖的受体蛋白家族的一个新成员，本发明的tonB依赖的受体蛋白被命名为人新型tonB依赖的受体蛋白1(human tonB-dependent receptor proteins，hTDRP)。

本发明的另一个目的是提供一种新的tonB依赖的受体蛋白家族成员，该蛋白被命名为hTDRP。

本发明的再一个目的是提供一种利用重组技术生产所述hTDRP的方法。

本发明还提供了hTDRP基因序列和多肽的应用。

在本发明的一个方面，提供了一种分离出的DNA分子，它包括：编码具有人hTDRP蛋白活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.1中从核苷酸166-378位的核苷酸序列有至少90％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度严紧条件下与SEQ ID NO.1中从核苷酸166-378位的核苷酸序列杂交。较佳地，所述的序列编码一多肽，该多肽具有SEQ ID NO.2所示的序列。更佳地，该序列具有SEQ ID NO.1中从166-378位的核苷酸序列。

在本发明的另一方面，提供了一种分离的hTDRP蛋白多肽，它包括：具有SEQ IDNO.2氨基酸序列的多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQID NO.2序列的多肽。

在本发明的另一方面，提供了一种载体，它含有上述分离出的DNA。

在本发明的另一方面，提供了一种所述载体转化的宿主细胞。

在本发明的另一方面，提供了一种产生具有hTDRP蛋白活性的多肽的方法，该方法包括：

(a)将编码具有hTDRP蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地连于表达调控序列，形成hTDRP蛋白表达载体，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.1中从核苷酸166-378位的核苷酸序列有至少90％的同源性；