[发明专利]抗肿瘤和免疫调节白术多糖、生产方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及从生药白术中提取白术多糖AMP-1的化学结构和生产方法。

技术背景

白术是一种传统的中药材，具有“补气健脾、燥湿利水、止汗、安胎之功效。白术中含有挥发油，如苍术酮、白术内酯和微量元素，有关白术多糖的报道很少。顾玉诚等(中草药，1992，10：507)从白术中分离出二种多糖，其中为分子量3.1×10⁴的甘露聚糖和分子量1.1×10⁴的果聚糖，无生物活性报道。池玉梅等(中药材，2001，9：647)得到分子量1.36×10⁵和分子量1.04×10⁵二种杂多糖，单糖组成一为半乳糖、鼠李糖、阿拉伯糖和甘露糖，二为木糖、阿拉伯糖和半乳糖，无生物活性报道。

发明内容

本发明的目的是提供方法简便、产率高和适于工业化生产的白术多糖。

本发明是从生药白术中提取获得的多糖，其化学结构为β-(1→2)-连接-D-半乳糖为主链，且有1/3～1/2的半乳糖的C₆上有β-D-甘露糖末端分枝。本发明的制备方法是将生药白术用水浸泡，采用煎煮获得水提液，有机溶剂沉淀，透析或膜分离，浓缩干燥获得白术总多糖。白术总多糖用有机溶剂二～三次分级沉淀获得白术多糖精品，再经凝胶柱层析纯化得多糖纯品AMP-1。该多糖无毒副作用，具有抗肿瘤和调节免疫功能作用。

该多糖由完全酸水解、还原、乙酰化和GC分析得知由甘露糖和半乳糖组成，其甘露糖和半乳糖摩尔比为1∶2.0～3.0，推荐的摩尔比为1∶2.5。例如实测甘露糖和半乳糖摩尔比为1∶1.91，经四舍五入为1∶1.91。由ESI-MS和HPLC分析得知分子量在3200～5800左右，推荐的平均分子量在3800左右。其谱图数据例如下面所述：IR 936cm^-1(β-D-吡喃半乳糖基)；¹H-NMR：δ(ppm)＜5.0(β-D-吡喃半乳糖基和β-D-吡喃甘露糖基)；¹³C-NMR：δ₁(ppm)106.4(C-1)，84.4(C-4)，80.7(C-2)，78.0(C-3)，65.4(C-5)，64.3(C-6)；δ₂(ppm)95.7(C-1)，76.0(C-4)，75.7(C-5)，74.5(C-3)，72.8(C-2)，63.7(C-6).δ₁为β-D-比喃半乳糖残基，δ₂为β-D-吡吡喃甘露糖末端残基。

从AMP-1甲基化、还原、乙酰化衍生物的GC-MS图谱分析得知，AMP-1含有[Manp]1→碎片、→2[Galp]1→和→2，6[Galp]1→碎片，其摩尔比2∶2～4∶2。根据甲基化、NMR等分析，AMP-1具有以下重复单元结构：

式中，Manp为甘露糖，Galp为半乳糖，1、2、6分别代表单糖的取代位置，n＝0～2，m＝3～4。

本发明的制备方法包括将生药白术干燥用水浸泡，煎煮获得水煎液提取白术多糖(其目的是获得与临床用药水煎剂加工方法相同的白术多糖)。采用不同浓度的有机溶剂沉淀2～3次获得白术多糖精品，精品再经凝胶柱层析纯化可得多糖纯品AMP-1。

具体来说，将干燥后的生药白术粉碎或切片，用水浸泡，煎煮，其中生药白术与浸泡水或煎煮水的重量比推荐是白术∶水＝1∶5-15，尤其推荐用10-12倍重量或更多的水，浸泡0.5-12小时。常压煎煮时间推荐0.5-2小时。所述水推荐为无离子水。浸泡液和水提液的pH值推荐保持在5.0-8.0。

过滤，滤液经或不经浓缩，用有机溶剂沉淀后离心。离心所得沉淀用水溶解，推荐用1-5倍重量的水溶解。

离心，上清液透析或膜分离，透析时间推荐为24-72小时，透析用透析膜、透析袋，其孔径推荐截留分子量在1000以下，尤其推荐截留分子量为500～1000的。

浓缩干燥获得总多糖，其中干燥或减压浓缩温度推荐低于60℃进行，最好采用低温真空浓缩或冷冻干燥，例如在30～60℃干燥或浓缩，压强推荐控制在0.08～0.1MPa。