[发明专利]一种基因芯片的纳米金标记银染检测法

说明书

技术领域

本发明一种基因芯片的纳米金标记银染检测法涉及一种基因芯片检测方法，特别是一种基因芯片的非放射性标记、非荧光标记检测法。

背景技术

DNA芯片(基因芯片)是近几年在高科技领域内出现的最具时代特征的重大科技进展之一。它是微电子学、物理学、化学、材料科学与生命科学交叉结合的高科技。基因芯片[又称DNA芯片、生物芯片、DNA微探针阵列(microarray)是将大量基因探针，按特定的排列方式固定在固体载体上，它通过与被检测基因的碱基序列进行互补匹配，实现核酸序列的分子识别，是高效地大规模获取相关生物信息的重要手段。基因芯片的相关技术包括：基因芯片的制备技术、样品的处理和标记技术、杂交和检测技术以及基因芯片设计和杂交图像的分析技术等。对于分子生物学、生物医学的研究来说，一个基本的前提是DNA序列的测定和分析。在对传统DNA测序方法和序列分析方法进行改进的过程中，以基因芯片为代表的生物芯片技术应运而生。基因芯片的原型是80年代中期提出的，具有多种不同的应用价值，如基因表达谱测、多态性分析、基因组文库作图、药物筛选、疾病诊断和预测及杂交测序等，它使得合成、固定高密度的数以万计不同种类的探针分子切实可行，而且借助激光共聚焦显微扫描技术，可以对杂交信号进行实时、灵敏、准确的检测和分析。

基因芯片技术将生命科学研究中所涉及的许多不连续的分析过程，如样品制备、化学反应和分析检测等，通过采用微电子、微机械等工艺集成到芯片中，使之连续化、集成化和微型化。这一技术的成熟和应用将在新世纪里给遗传研究、疾病诊断和治疗、新药发现和环境保护等生命科学相关领域带来一场革命。

目前，常规的分子杂交结果的检测方法主要是荧光标记检测法和同位素标记检测法。膜芯片的分子杂交过程是，将待检测样品固定于滤膜上，与同位素或荧光标记的探针在一定杂交液及温度下进行杂交，一般均需要较长的时间(4-24h)才能完成分子杂交过程，且一般每次只能检测为数不多的一个到几个探针。基因芯片是将已知序列的DNA探针，固化于玻璃等基片的表面，而将待检测样品进行标记并与微集成阵列进行杂交。同位素标记检测法由于操作复杂，有污染，获取数据速度慢等缺点，逐步为荧光标记检测法所替代，而基因芯片检测不仅使得检测过程平行化，可以同时检测成百上千的基因序列；而且由于集成的显微化，使得杂交所需的探针及待检测样品均大为减少，杂交时间明显缩短，一般的分子杂交过程可在30min内完成。但是由于其信号读取设备价格昂贵，从而大大制约了芯片技术在医学临床诊断方面的应用。

发明内容

本发明要解决的技术问题是针对目前基因芯片检测设备价格昂贵的问题，提供一种不需昂贵检测仪器的而且试剂有效保存时间长的纳米金标记银染基因芯片检测技术。

本发明的技术解决方案是利用最新的银在纳米金颗粒上沉积使杂交信号通过呈现于芯片表面，即在待检测样品的聚合酶链式反应(PCR)过程中，加入地高辛或生物素标记，然后与芯片进行杂交，杂交以后用抗体与纳米金标记的地高辛或生物素标记结合，再加入银染试剂就可得到相应的信号。