[发明专利]蝎抗心律失常肽及其制备方法和应用无效
| 申请号： | 02115487.2 | 申请日： | 2002-01-30 |
| 公开（公告）号： | CN1379042A | 公开（公告）日： | 2002-11-13 |
| 发明（设计）人： | 李文鑫;彭方;曾宪春;何小华;朱顺义 | 申请（专利权）人： | 武汉大学 |
| 主分类号： | C07K14/435 | 分类号： | C07K14/435;C12P21/02;A61K38/17;A61P9/06 |
| 代理公司： | 武汉科宏专利事务所 | 代理人： | 王敏锋 |
| 地址： | 430072*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 心律失常 及其 制备 方法 应用 | ||
1、一种蝎抗心律失常肽，其特征是，该活性肽的氨基酸序列如下：DGYIRGSNGCLWGNEGCNKECKGFGYCWTWGLACWCEGLTWKSESNTCG。
2、一种实现权利要求1的蝎抗心律失常肽的制备方法，包括下列步骤：设计PCR引物，用PCR从东亚钳蝎蝎毒cDNA库中扩增抗心律失常肽基因片段，并通过表达载体转化到大肠杆菌中表达，设计的PCR上游引物含小肠激酶酶切位点，用PCR扩增的抗心律失常肽基因片段经过限制性内切酶酶切，克隆到pGEX-5x-1表达载体中，转化到大肠杆菌BL21中获得重组大肠杆菌BL21(pGEX/BmKIM)，经IPTG诱导后，经谷胱甘肽转移酶亲和层析柱纯化，用小肠激酶酶切表达所得的融合蛋白，并脱盐而得到可溶的抗心律失常肽。
3、根据权利要求2所述的蝎抗心律失常肽的制备方法，其特征是：PCR上游引物A1，5’-GCCGGATCCCCGATGACGATGACAAGGATGGATATATAAGA-3’，该引物含有BamHI限制性内切酶酶切位点和小肠激酶酶切位点；PCR下游引物A2，5’-GCCCTCGAGTCAACCGCATGTATTACTTTCAG-3’该引物含有XohI限制性内切酶酶切位点；用PCR扩增所得产物经BamHI和XohI酶切后克隆到pGEX-5x-1，转化大肠杆菌得到重组大肠杆菌BL21(pGEX/BmKIM)、用IPTG诱导表达后经谷胱甘肽转移酶亲和层析柱纯化，用小肠激酶对融合蛋白进行酶切获得可溶性的抗心律失常肽。
4、权利要求1所述的蝎抗心律失常肽在制备抗心律失常药中的应用。
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