[发明专利]低密度脂蛋白胆固醇测定方法及试剂

说明书

本发明涉及一种低密度脂蛋白胆固醇的测定方法及试剂。

众多流行病学、遗传学与临床研究证明，血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平与动脉粥样硬化、冠心病(CHD)的发生率成正相关，通常以高含量低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)作为冠心病(CHD)的首要致病因素，所以，低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)测定方法的准确性至关重要，现今临床上常用的方法有Friedewaly公式化、化学沉淀法、电泳法、免疫分离法等，前两中最常用，但测定中易受高甘油三酯和血清预处理产生的误差影响。所以，研究一种标本用量少、测定简便快捷、干扰少、高精确度和高准确度的低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)测定方法和测定试剂适应自动化分析是十分必要的。

近年来，国内外也开发了一些在自动生化分析仪上使用的LDL-C直接测定试剂，其中，一些采用聚阴离子和二价金属盐复合物、糖化合物和二价金属盐复合物，如中国专利CN-1281981A公开了一种低密度脂蛋白胆固醇测定试剂，它包括由α-磺化环状糊精、硫酸葡聚糖、MgCl2、二氯苯酚、N-乙基-N-(3-甲苯基)-N＇-琥珀酰乙烯二胺、3-(N-吗啡啉)-2-羟丙基磺酸缓冲液组成的试剂I和由胆固醇脂酶(CEH)、胆固醇氧化酶(COD)和过氧化物酶(POD)、4-氨基安替比林、聚氧乙烯-聚氧丙烯聚醚、3-(N-吗啡啉)-2-羟丙基磺酸缓冲液组成的试剂II，这种低密度脂蛋白胆固醇测定试剂，需要高浓度的二价金属盐(如镁离子)，而这些二价金属盐和上述聚阴离子、糖化合物、非HDL脂蛋白形成的书絮状复合物，而这些二价金属盐复合物，检测完毕后被排泄，在排液管道中易与其他碱性废液反应形成盐而发生沉淀，造成管道堵塞，容易对自动分析仪造成不良影响及故障。

本发明的目的是为了解决上述技术的不足而提供一种使试剂能够直接测定、无须标本前处理、不须沉淀和离心、不堵塞管道、稳定性强，测定结果受外界干扰小、测定精度高的低密度脂蛋白胆固醇测定方法及试剂。

为了达到上述目的，本发明所设计的低密度脂蛋白胆固醇测定方法，其特征是首先第一步利用多聚物和表面活性剂对低密度脂蛋白(LDL)的特异作用形成稳定复合物掩蔽，其它脂蛋白在缺乏偶联剂条件下，在表面活性剂、胆固醇酶联试剂作用下被反应清除；然后第二步通过加入表面活性剂释放出低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)，再在表面活性剂、胆固醇酶联试剂作用下参于完整的Trinder反应，根据不同敏感的显色剂，在波长546nm至700nm内选择确定的波长处测得吸光度与低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量成正比，而求得低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量。为了在第一步反应中对低密度脂蛋白(LDL)的特异作用形成稳定复合物掩蔽，所述的多聚物是聚乙烯硫酸盐或中性多聚物PEGME或硫酸葡聚糖或α-磺化环糊精及其相互组合。

根据本发明所提供的低密度脂蛋白胆固醇测定方法而提供的一种低密度脂蛋白胆固醇测定试剂，它分为两个组份A、B，由胆固醇脂酶(CEH)、胆固醇氧化酶(COD)和过氧化物酶(POD)组成的胆固醇酶联试剂和4-氨基安替比林可以全部设在A组份中，也可以全部设在B组份中或A、B组份中分别设置；A、B组份的其它成份组成可以是：

A组份：

   缓冲液                       5-500mmol/L

   多聚物                       0.1mg-5000mg/L

   防腐剂                       0.005-10g/L

   稳定剂                       0.05-500g/L

   表面活性剂                   0.05g-10g/L

   去干扰剂                     0.005-5mmol/L或0.1-5KU/L

B组份：

   缓冲液                       5-500mmol/L

   表面活性剂                   0.05-10g/L

   显色剂                       0.1-10mmol/L

   稳定剂                       0.03-300g/L

   防腐剂                       0.005-10g/L

根据多聚物的不同选择，所述的低密度脂蛋白胆固醇测定试剂的A、B两个组份可以是：