[发明专利]高密度脂蛋白胆固醇测定方法及试剂

说明书

本发明涉及一种高密度脂蛋白胆固醇的测定方法及试剂。

高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)是动脉粥样性质病的保护因子，是心血管疾病的预防和危险评估的一个重要指标。HDL-C的测定，国内普遍采用磷钨酸-镁沉淀法，此法需预先处理、沉淀分离非HDL脂蛋白组份，再吸取高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)组份，整个分离过程采用吸管吸取样品，操作误差大(对不同的操作人误差更大)，血清标本预处理时间长达30分钟，不适合进行批量自动分析，无法满足医院快捷、准确的要求，近年来，国外也开发了一些在自动生化分析仪上使用的HDL-C直接测定试剂，他们常用硫酸葡聚糖、肝素、磷钨酸、聚乙二醇、环湖精、低聚糖等二价金属离子来掩蔽HDL脂蛋白外的脂蛋白组份，再进行DHL-C检测。在这些方法中，常用高浓度的镁离子和上述聚阴离子、糖化合物、非HDL脂蛋白形成的书絮状混合物，当检测完毕，检测废液被排出，其过程中易与排液管道中的其他碱性废液形成氢氧化镁而发生沉淀，引起管道堵塞，容易对自动分析仪造成不良影响(如总蛋白试剂废液含高浓度的氢氧化纳)。

本发明的目的是为了解决上述技术的不足而提供一种使试剂能够直接测定、无须标本前处理、不须沉淀和离心、不堵塞管道、稳定性强，测定结果受外界干扰小的高密度脂蛋白胆固醇测定方法及试剂。

为了达到上述目的，本发明所设计的高密度脂蛋白胆固醇测定方法，是用聚乙烯硫酸盐和表面活性剂与极低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)结合掩蔽，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)不受掩蔽，并受胆固醇脂酶(CEH)、胆固醇氧化酶(COD)和过氧化物酶(POD)作用，根据不同敏感的显色剂，在波长546nm至700nm内选择确定的波长处测得吸光度与高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量成正比，而求得高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量。为了提高测定的精确度，该方法所采用的测定试剂包括胆固醇脂酶(CEH)、胆固醇氧化酶(COD)、过氧化物酶(POD)、缓冲液和表面活性剂，在测定试剂中还可含有聚乙烯硫酸盐。为了得到最为理想的检测效果，本发明提供的高密度脂蛋白胆固醇测定试剂，特别可以分为两个组份A、B，胆固醇脂酶(CEH)、胆固醇氧化酶(COD)和过氧化物酶(POD)可以全部设在A组份中，也可以全部设在B组份中或A、B组份中分别设置；A、B组份的其它成份组成是：

    A组份：

    缓冲液                    5-500mmol/L

    聚乙烯硫酸盐              0.5mg/L-5000mg/L

    中性多聚物                0.1mg/L-500mg/L

    显色剂                    0.1mmol/L-10mmol/L

    防腐剂                    0.01g/L-5g/L

    稳定剂                    0.01mmol/L-200mmol/L

    表面活性剂                0.05-50g/L

    去干扰剂                  0.005-20mmol/L

B组份：

    缓冲液                    5-500mmol/L

    4-氨基安替比林            0.05-1g/L

    表面活性剂                0.01-20ml/L

    稳定剂                    0.005-50g/L

    防腐剂                    0.01-5g/L