[发明专利]通过发酵生产L－谷氨酰胺的方法和产生L－谷氨酰胺的细菌

权利要求书

1.具有L-谷氨酰胺生产能力并且已经修饰以致它的细胞内谷氨酰胺合成酶活性被增强的棒状杆菌细菌。

2.根据权利要求1所述的细菌，其中通过增强谷氨酰胺合成酶基因的表达量增强谷氨酰胺合成酶活性。

3.根据权利要求2所述的细菌，其中通过增加编码谷氨酰胺合成酶的基因的拷贝数或修饰该基因的表达控制序列增加谷氨酰胺合成酶的基因的表达量，使编码细菌的细胞内谷氨酰胺合成酶的基因的表达增强。

4.根据权利要求1所述的细菌，其中通过腺苷酰化去除细胞内谷氨酰胺合成酶的活性控制增强了谷氨酰胺合成酶的活性。

5.根据权利要求4所述的细菌，其中腺苷酰化对细胞内谷氨酰胺合成酶的活性控制被一个或多个携带的其腺苷酰化的活性控制缺陷的谷氨酰胺合成酶去除，降低了细菌细胞中的谷氨酰胺合成酶和腺苷酰转移酶活性并降低了细菌细胞中的PII蛋白质活性。

6.根据根据权利要求1-5的任何一项所述的细菌，其中细菌已经进一步修饰使它的细胞内谷氨酰胺脱氢酶活性增强。

7.根据权利要求6所述的细菌，其中通过增强谷氨酰胺脱氢酶基因的表达量增强了谷氨酰胺脱氢酶的活性。

8.根据权利要求7所述的细菌，其中增加编码谷氨酸脱氢酶的拷贝数或修饰基因的表达控制序列增加了谷氨酸脱氢酶基因的表达量，使编码细菌细胞内的谷氨酸脱氢酶的基因的表达增强。

9.生产L-谷氨酰胺的方法，包括在培养基中培养权利要求1-8任一项所述的细菌，在培养基中生产和积累L-谷氨酰胺，并且回收L-谷氨酰胺。

10.编码下面的(A)或(B)中定义的蛋白质的DNA：

(A)具有SEQ ID NO：2的氨基酸序列的蛋白质，

(B)具有含一个或几个氨基酸残基的替代，缺失，插入，叠加或颠换的SEQID NO：2的氨基酸序列并且具有谷氨酰胺合成酶活性的蛋白质。

11.根据权利要求10所述的DNA，是下面(a)或(b)定义的DNA：

(a)在SEQ ID NO：1的核苷酸序列中含有核苷酸编号为659-1996的核苷酸序列的DNA，

(b)在严格条件下与SEQ ID NO：1的核苷酸序列中核苷酸659-1996的核苷酸序列或可以与从该序列中制备的探针杂交，并且编码具有谷氨酰胺合成酶活性的DNA。

12.编码下面(C)或(D)中定义的蛋白质的DNA：

(C)具有SEQ ID NO：3的氨基酸序列的蛋白质，

(D)具有含一个或几个氨基酸残基的取代，缺失，插入，叠加或颠换的SEQ ID NO：3的氨基酸序列，并且具有谷氨酰胺合成酶和腺苷酰转移酶活性的蛋白质。

13.根据权利要求12所述的DNA，是下面(c)或(d)定义的DNA：

(c)含有SEQ ID NO：1的核苷酸序列中的核苷酸编号2006-5200的核苷酸序列的DNA，

(d)在严格条件下与SEQ ID NO：1的核苷酸序列中的核苷酸编号2006-5200的核苷酸序列或从该序列中制备的探针杂交并且编码具有谷氨酰胺合成酶腺苷酰转移酶活性的蛋白质的DNA。