[发明专利]新型霍乱弧菌菌株

权利要求书

1、一种新型霍乱弧菌菌株，其特征在于导入了能够介导噬菌体免疫的rstR基因和能够诱导保护性抗毒免疫的ctxB基因，二者在已不含CTX基因组的霍乱弧菌菌株为出发菌株构建的，以thyA基因为选择压力的质粒染色体致死平衡系统中高效表达。

2、按照权利要求1所述的霍乱弧菌菌株，其特征是以IEM101为出发菌株，构建thyA基因精确缺失的营养缺陷株IEM101-T。

3、按照权利要求1所述的霍乱弧菌菌株，其特征是用PCR方法获得大肠杆菌的thyA基因和El Tor来源的rstR基因，ctxB基因系从质粒pBR中酶切获得。

4、根据权利要求1的霍乱弧菌菌株，特征在于用去除了氨苄青霉素抗性基因的平衡质粒，使克隆的基因高拷贝的表达。

5、根据权利要求1的霍乱弧菌菌株，特征在于加入新的功能基因或替换其它基因进行菌苗改造。

6、根据权利要求1的霍乱弧菌菌株，特征在于加入或替换其它rstR基因，和/或加入其它保护性抗原基因而构建成肠道多价菌苗。

7、根据权利要求1-6中任一项的霍乱弧菌菌株，它是IEM108。

8、权利要求1-6中任一项的霍乱弧菌菌株在制备预防和/或治疗霍乱的疫苗中的用途。

9、权利要求1-6中任一项的霍乱弧菌菌株的制备方法，其特征是将所述thyA基因的PCR产物与质粒载体连接，再将ctxB基因连入，然后电击入以不含CTX基因组的霍乱弧菌菌株为出发菌株构建的thyA基因精确缺失的营养缺陷株，获得含有重组质粒的营养缺陷株。再将rstR基因的PCR产物连入重组质粒，去除大部分氨卞抗性基因后，电击入thyA基因精确缺失的营养缺陷株，获得含有重组质粒的转化子。

10、制备生物安全性霍乱弧菌口服活菌苗的方法，其特征是将权利要求1-6中任一项的菌株接种于普通LB(pH7.6)中，37℃培养所得的菌悬液直接口服，或按常规方法将该菌液冻干后，悬浮于0.85％Nacl溶液中即可。