[发明专利]羟乙葛根素在制备治疗脑血管病新药中的应用

说明书

本发明涉及医药领域，是关于葛根素衍生物在制备治疗脑血管病新药中的应用。

缺血性脑血管病是严重危害人类健康的疾病之一，在人群中具有发病率、致残率、死亡率高的特点。自从烈性传染病被基本控制以来，缺血性脑血管病一直是三大死亡疾病之一。据统计，在我国每年约有150万人罹患此病，约有100万人因该病致死，严重危害人类健康，威胁着国民经济的迅速发展。

葛根素是1993年卫生部批准的治疗心、脑血管病的新药，上市以后，对防治心、脑血管病起到积极作用，社会效益、经济效益显著。2000年底，葛根素及其注射液的生产、销售已突破2亿元。

但在研究、开发葛根素时，即已发现该品在肠胃道中较难吸收，在申报新药资料中，山东省医科院放射所的<[H³]葛根素药代动力学实验报告>中提出：本品虽能通过血脑屏障进入脑内，但含量较低，难于充分发挥对脑血管的生理活性。新药上市后，很多学者采用体内、体外等各利试验方法，也对葛根素的作用机理和其他生理活性进行研究，均提出增加口服血药浓度和血脑屏障通过率的要求。

本发明的目的在于提供一种可提高葛根素的口服血药浓度和血脑屏障通过率较高的治疗脑血管病新药。

本发明的解决方案是由中药葛根中提取葛根素采用羟乙基化方法在葛根素基础上引入侧链，改造成具生理活性的葛根素衍生物，该化合物是具有如下结构的羟乙葛根素。

英文名为Hydroxyethylpuerarin，简写为HEP；

化学名为：8-C-β-D-吡喃葡萄糖-7，4-羟乙氧异黄酮

英文化学名为：8-C-βD-glucopyranosyl-7，4’-dihydroxyethylaxyisoglavone.

用紫外、红外、质谱，H-核磁共振谱和13C-核磁共振谱对该化合物的结构进行了鉴定。并以高效液相色谱法测定其含量按干燥品计≥97.0％。

将葛根素的两个酚羟基改变为两个酚羟乙基的设计目的，是想增加其脂溶性，以便提高葛根素对血脑屏障通过率。用实验比较了葛根素与羟乙葛根素在水中的溶解度差异，结果见表1。

表1在水中溶解度比较

    葛根素    羟乙葛根素水中溶解量(mg)^*    39.96    37.04

^*在25℃，10ml蒸馏水中溶解量

实验结果表明，经改造后的羟乙葛根素，其水溶性的减少，标志着其脂溶性的升高，也将提高其血脑屏障通过率，而广泛用于脑血管病的治疗。

进一步探讨了化合物羟乙葛根素治疗脑血管病的作用机理。实验采用血管内栓线阻断法造成大鼠大脑中动脉区可逆性脑缺血再灌注损伤模型，通过测定血浆内皮素水平、脑组织亚细胞水平的生化指标测定、流式细胞学和病理组织学检查，研究脑缺血再灌注损伤后各项指标的变化及化合物羟乙葛根素对其影响，观察了该化合物对局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。实验结果如下：

实验一、化合物HEP急性毒性研究

各组动物均未见明显中毒表现，即无法测得LD₅₀值，即以最高剂量200mg/ml和最大容积0.5ml一次给予20只小鼠(雌雄各半)，观察72小时，无明显死亡毒性。按每只动物20g计，该化合物的LD₅₀＞5g/kg。

实验二、梗死指标观察

1、Longa’s五分制评分检测神经运动功能障碍，结果显示，缺血损伤组神经障碍评分显著高于假手术组(P＜0.05)。见表2。

表2  大鼠大脑中动脉阻断1小时后神经损伤分级(x±s)