[发明专利]吡嗪酰胺药敏培养基及其制备方法

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一种结核菌的培养基及其制备方法，尤其属于吡嗪酰胺药敏培养基及其制备方法。

(二)背景技术

结核病是一种传染性疾病，随着对病人的治疗，其耐药性病人在逐渐增多，因此，对菌阳患者作药敏测试必不可少。在此之前，多偏重于监测流行病学的耐药趋势，只作一线药为主(不含吡嗪酰胺)的6种药敏测试。当耐药特别是耐多药患者增加后，逐渐强调个体化治疗，因此增列药敏品种势在必行。吡嗪酰胺(PZA)是具有灭菌、杀菌活性的一线药，过去排除在常规药敏测试以外，其原因在于它只能在酸性培养基中测试，如匡铁吉1990年在《中国防痨通讯》上发表的《92号土豆汤琼脂培养基用于吡嗪酰胺药敏实验初步探讨》曾就酸性培养基数次作过配制，都很有效，但其不足一是由于其操较繁琐；二是当用土豆淀粉作为原料时，由于其它相配成分不易得到。进入基因时代以来，虽然对吡嗪酰胺(PZA)的耐药基因pncA在5年前已有阐明，如，但Davies等和Mitchison等阐述：除pncA之外尚有其它未发现的耐药机理，只查基因型法如pncA是不够、不可靠的，还要靠表型法如BACTEC460解决之。但BACTEC设备昂贵，培养基和试剂全赖进口，费用高，不能推广使用，另外放射核素处理难度大，污染环境。

(三)、技术内容

本发明的目的在于克服上述不足，提供一种成分简单、易于配置、酸碱度值(PH)稳定、能满足吡嗪酰胺活性需要、使结核菌生长良好并具有易制备和推广的吡嗪酰胺药敏培养基及其制备方法。

其技术内容：吡嗪酰胺药敏培养基，由下述容积百分比的成分制备成的培养基：磷酸二氢钾：0.15、硫酸镁：＞0.015～0.03、枸橼酸镁：0.0375、天门冬素：0.225、甘油：0.75、全蛋液：62.5，为使吡嗪酰胺药敏培养基的酸碱度值(PH)稳定，故采用氧化还原电位在1100毫伏以上，酸碱度值(PH)在2.7以下的酸化离子水，其加入量：36.25～38.13，2％孔雀绿水溶液：0.5～0.625、吡嗪酰胺0.005或0.01。

吡嗪酰胺药敏培养基的制备，其步骤如下：

(1)、将磷酸二氢钾：0.15、硫酸镁：＞0.015～0.03、枸橼酸镁：0.0375、天门冬素：0.225、甘油：0.75、全蛋液：62.5、2％孔雀绿水溶液：0.5～0.625、吡嗪酰胺0.005或0.01与36.25～38.13酸化离子水进行混合，其酸化离子水氧化还原电位在1100毫伏以上，酸碱度值(PH)在2.7以下；

(2)、对上述混合物进行加热至沸腾，直至上述混合物完全溶解；

(3)、采用自然冷却法将混合液体冷却至室温；

(4)、将经消毒纱布过滤后的全蛋液加入并搅拌至均匀；

(5)、将2％孔雀绿水溶液加入并使其混匀；

(6)、用当量的盐酸调节其培养基液的酸碱度值(PH)在5.2～5.4范围内；

(7)、将吡嗪酰胺加入到培养基液中使其浓度达到要求的值；

(8)、分装经121℃高压灭菌的试管内，每管加含药培养基5毫升；

(9)、斜置血清凝固器内，斜面高度占试管的三分之二，在90℃、1.5小时或85℃、1小时间歇两次；

(10)冷却后，37℃无菌试验24小时。

培养基斜面颜色鲜艳，表面光滑无泡。

药物敏感性测定：

按照1996年中国防痨协会制定的《结核病诊断细菌学检验规程》进行测定。

结果

PZA药敏培养基(凝固前)的最适pH。