[其他]胸腺因子Ｄ的制备工艺

说明书

胸腺因子Ｄ药物的制备，以动物胸腺组织为原料，通过匀浆、抽提、加热、透析、灭菌等步骤制成，较其他同类药物的制备方法简便。工艺简单，使用安全，成本低廉，适于工业上大规模生产。本品稳定性好，有效期长，运输、贮存和使用方便。对急、慢性病毒性肝炎，难治性肺结核、银屑病、恶性肿瘤和免疫性疾病的疗效较其他药物为优。

本发明属于胸腺激素药物的制备工艺。

现有的胸腺激素类药物，一般以动物的胸腺组织为原料，经过匀浆，用酸性生理盐水搅拌抽提，过滤或离心去残渣，把清液pH调至中性，加热到80℃～90℃，保持15分钟，而后冷却，过滤或离心去除杂蛋白，清液用丙酮沉淀，硫酸铵盐析，再用透析袋或透析纸透析，以去除硫酸铵，再经超滤器超滤，葡聚糖层析等步骤得到较纯的物质后，经除菌过滤才能灌封制成。该方法的缺点在于：丙酮沉淀需用大量丙酮，价格昂贵、有毒、不易操作。用透析法去除硫酸铵时，会丢失大量很高生物活性的小分子成分，使最终提取得到的胸腺激素较天然成分相差甚远，影响医疗效果。此外热变性时杂蛋白凝固不完全，去除不彻底，需用高速离心机和进口的超滤器等大型设备，工艺复杂，生产周期长，易污染，且超滤时不能解决高分子物质分离的浓差极化问题。再者，整个胸腺激素的制备过程都是在无菌条件下进行的，产品不灭菌，这样，不仅不易生产，也不利于运输、贮藏和使用。有些制剂是收集透析外液而制备的，但分子量几千的部分又被去除，影响生物活性和临床疗效。

本发明的目的在于设计一种工序简单，成本低廉，活性强，稳定性好的胸腺因子D的制备工艺。

本发明的目的是这样实现的：首先，与现有技术一样，经过原料匀浆、抽提、过滤或离心去残渣，把清液pH调至中性，而后加热至81℃～121℃，保持10～15分钟，冷却。过滤或离心去除杂蛋白。所得清液直接用人工肾透析器透析，将透析液除菌过滤，灌封分装，加热灭菌，得到胸腺因子D的灭菌制剂。

采用人工肾透析器，是本发明的主要特征之一：该透析器是上海医用诊察仪器厂从日本硝公司引进全套透析器生产设备，并用进口空心纤维生产的TX-110空心纤维透析器，具有良好的透析和超滤作用（医疗器械1985，9（6）：59），其用途本来是进行血液透析，以去除中、小分子的体内代谢产物和水份，治疗尿毒症性体液潴留、心力衰竭（上海第一医学院学报1982，9（3）：161）和急、慢性肾功衰竭（中华内科杂志1981，20（6）：326）。后来，又有人用它来回收腹水，以治疗肝硬化，难治性腹水（中华内科杂志1984，23（5）：306）。

人工肾透析器的使用方法是已知的，在上述文献中都有明显记载。本发明使用该透析器制备胸腺因子D时，将加热去蛋白后的清液连接上孔，通过中空纤维内腔，上侧孔塞住。下侧孔接一收集瓶，并连接一吸引器成负压，保持在100mmHg左右，即可使中、小分子量物质通过中空纤维膜透析和超滤而出，并收集之，而不能透过中空纤维膜的大分子物质仍由内腔通过，从下孔流出而去除之。

采用人工肾透析器，不但省去了传统方法制备胸腺素的四个程序，即丙酮沉淀，硫酸铵盐析，超滤器超滤和葡聚糖层析，大大简化了工艺流程，缩短了生产周期，而且因为该透析器有两个出口，一个是下侧孔，收集了分子量小于15.0Kd的全部有效胸腺激素，另一个是下孔，去除了分子量大于15.0Kd，无明显活性，易引起过敏反应的全部胸腺激素前体，使产品得率比胸腺肽增加2.5倍，生物活性提高10倍。由于上述透析器的两条管。使收集和清除得以同时进行，因此解决了高分子物质分离纯化的浓差极化问题，在胸腺激素的制备史上是从未有过的。

此外，本发明的另一特征是：在制备工艺中把加热去蛋白的温度由80℃提高到90℃。现有技术已经证明，猪胸腺激素F₅在37℃～90℃加热15分钟，活性完全不受影响（南京大学学报（自然科学版）1979，(1):121)，但尚无人将其用于胸腺激素的制备工艺中，将加热温度提高到90℃，不仅活性不受影响，而且因为温度提高，可使蛋白凝固完全，便于用普通离心机去除之。