[其他]橡胶聚合酶的生产方法

权利要求书

1、一种生产基本上纯化形式的橡胶聚合酶的方法，包括下述各步骤：

（1）先从含有橡胶聚合酶的三叶胶属的一种植物中制备化学稳定的胶乳，这种酶可与上述胶乳中的橡胶粒子结合在一起，也可以游离于溶液中，制备方法是将大约1至10体积的由多羟基化合物、防微生物试剂和缓冲剂组成的稳定溶液，加入到大约一个体积的上述胶乳中;

（2）用层析分离法在0-4℃分离上述胶乳溶液中的游离的橡胶聚合酶;

（3）将分离出的橡胶聚合酶提纯，以制备基本上纯化形式的橡胶聚合酶。

2、根据权利要求1的方法，其中所述的植物是巴西三叶胶。

3、根据权利要求1的方法，其中所述稳定溶液可以含有巯基化合物。

4、根据权利要求1的方法，其中所述多羟基化合物可以是甘油，山梨糖醇、蔗糖等。

5、根据权利要求1的方法，其中所述稳定溶液是由大约10%至80%（重量/体积）的甘油，大约0.001%至1%（重量/体积）的叠氮化钠，和缓冲剂组成的;溶液pH值大约从7至12。

6、根据权利要求5的方法，其中所述稳定溶液是由50%（重量/体积）的甘油，大约0.3%（重量/体积）的叠氮化钠和大约0.1M的碳酸氢钠组成的。

7、根据权利要求6的方法，其中所述稳定溶液，还含有大约5mM的半胱氨酸。

8、根据权利要求1的方法，其中所述层析分离法是指离子交换层析法。

9、根据权利要求8的方法，其中所述离子交换层析法是指包括用离子交换树脂与上述胶乳混合的层析分离方法，上述在溶液中游离的橡胶聚合酶与树脂结合，产生聚合酶-树脂复合物，分离复合物，然后从复合物中分离出橡胶聚合酶。

10、根据权利要求9的方法，其中所述离子交换树脂是指阴离子交换树脂。

11、根据权利要求1，其中所述提纯，包括下述各步骤：

将分离后的橡胶聚合酶进行透析制成一种透析液;

加一种凝胶剂到上述透析液中，使生成凝胶聚合酶复合物;

将上述复合物从上述透析液中分离出来;

将上述聚合酶从上述复合物中分离出来;

将取出的聚合酶进行凝胶过滤层析分离，以制备基本上纯化形式的橡胶聚合酶。

12、根据权利要求11的方法，其中所述的提纯还包括另一操作步骤：将上述渗析液与一种吸附蛋白质的吸附剂混合，然后在加入上述凝胶前，从透析液中分离出吸附剂。

13、根据权利要求12的方法，其中所述吸附剂是指γ-氧化铝。

14、根据权利要求11的方法，其中所述凝胶剂是指磷酸钙凝胶。

15、根据权利要求1的方法，其中所述提纯，包括下述各步骤：

将上述溶液中游离的橡胶聚合酶与抗橡胶聚合酶的各种固相抗体接触，以便生成橡胶聚合酶抗体复合物;

从上述溶液中将复合物分离;

从上述复合物中分离出橡胶聚合酶。

16、生产基本上纯化形式的橡胶聚合酶的方法，包括下述各步骤：