[发明专利]新颖的杆菌mHKcel纤维素酶

权利要求书

1.分离的多核苷酸，选自下列：

(a)SEQ ID NO：2的核酸序列，或者其完全互补序列；和

(b)核酸序列，其编码SEQ ID NO：3的氨基酸序列；

其中所述分离的多核苷酸编码具有纤维素酶活性的多肽。

2.分离的多核苷酸，其包括：

核酸序列，其在高度严紧的条件下，与SEQ ID NO：2的核酸序列杂交，

其中所述高度严紧的条件在42℃下，在50％甲酰胺，5X SSC，5X Denhardt′s溶液，0.5％SDS和100μg/ml变性的载体DNA中进行，随后在2 X SSC和0.5％SDS在室温下洗涤2次，并在0.1SSC和0.5％SDS在42℃下 再洗涤2次，和其中所述分离的多核苷酸编码具有纤维素活性的多肽。

3.权利要求1所述的分离的多核苷酸，其中所述多核苷酸选自mRNA、 DNA、cDNA和基因组DNA。

4.权利要求3所述的分离的多核苷酸，其中所述多核苷酸是DNA分子。

5.重组的木霉(Trichoderma)宿主细胞，其用权利要求1所述的分离的多核苷 酸转化。

6.权利要求5所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是瑞氏木霉(Trichoderma reesei)。

7.表达载体，其包括权利要求1的多核苷酸。

8.表达载体，包括权利要求1的分离的多核苷酸，可操作地连接于被宿主 细胞识别的调控序列上，所述宿主细胞是用所述载体转化的。

9.根据权利要求8所述的表达载体，包括调节多核苷酸序列，其具有来自 游动放线菌(Actinoplanes)的葡萄糖异构酶基因的启动子序列和来自链霉菌 (Streptomyces)纤维素酶基因的信号序列。

10.重组的宿主细胞，其用权利要求7所述的载体转化。

11.权利要求10所述的宿主细胞，其为原核细胞。

12.权利要求10所述的宿主细胞，其为真核细胞。

13.产生纤维素酶的方法，包括下列步骤：

(a)在合适的条件下，合适的培养基中，培养权利要求10所述的宿主细胞， 其中所述分离的多核苷酸被表达生产所述纤维素酶；和

(b)回收所述纤维素酶。

14.权利要求13所述的方法，其中所述宿主细胞是丝状真菌或者酵母细胞。

15.权利要求13所述的方法，其中所述宿主细胞是细菌。

16.权利要求15所述的方法，其中所述细菌是链霉菌。

17.权利要求1所述的分离的多核苷酸，其中所述多核苷酸是SEQ ID NO：2。

18.纯化的纤维素酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示，任选地，在所 述SEQ ID NO：3的氨基或者羧基末端可操作连接有标记多肽，其中所述标 记多肽选自聚组氨酸或者聚组氨酸苷氨酸标记；HIS6和金属鳌合标记，flu HA 标记多肽；c-myc标记；单纯疱疹病毒糖蛋白D标记；FLAG-肽；KT3表位 肽；微管蛋白表位肽；和T7基因10蛋白肽标记。

19.洗涤剂组合物，所述组合物包括具有纤维素酶活性的SEQ ID NO：3的氨 基酸序列的多肽。

20.洗涤剂组合物，包括表面活性剂和根据权利要求18的纤维素酶。

21.根据权利要求19所述的洗涤剂，其中所述洗涤剂是洗衣店洗涤剂。

22.根据权利要求19所述的洗涤剂，其中所述洗涤剂是餐盘洗涤剂。

23.饲料添加剂，包括根据权利要求18的纤维素酶。

24.处理木浆的方法，包括用根据权利要求18所述的纤维素酶接触所述木浆。