[发明专利]正交赖氨酰－tRNA和氨酰－tRNA合成酶对的组合物及其应用

权利要求书

1.一种翻译系统，该翻译系统包括：

正交赖氨酰tRNA(赖氨酰O-tRNA)以及优先将一个或多个氨基酸加载于赖氨酰 O-tRNA的正交氨酰tRNA合成酶(O-RS)，其中所述赖氨酰O-tRNA和O-RS来源于 超嗜热古菌(Pyrococcus horikoshii)，所述正交赖氨酰O-tRNA抑制翻译系统中核酸的 选择者密码子，

其中，所述O-RS是如SEQ ID NO：30所示的PhE444G、如SEQ ID NO：28所示 的PhΔAD、或是PhΔAD的I41和S268突变体，

所述正交赖氨酰O-tRNA是根据共有序列抑制型策略设计的，其含有 CU(X)XXXAA反密码子环，其中的(X)XXX是密码子的反向互补序列，且其茎区无 错配碱基。

2.如权利要求1所述的翻译系统，其特征在于，所述翻译系统包含细胞。

3.如权利要求2所述的翻译系统，其特征在于，所述细胞是大肠杆菌细胞。

4.如权利要求1所述的翻译系统，其特征在于，所述氨基酸是非天然氨基酸。

5.如权利要求4所述的翻译系统，其特征在于，所述非天然氨基酸是高谷氨酰胺。

6.如权利要求1所述的翻译系统，其特征在于，当所述O-RS在大肠杆菌内表达 时，它所具有的毒性等于或低于PhΔAD的I41和/或S268突变体。

7.如权利要求1所述的翻译系统，其特征在于，所述赖氨酰O-tRNA包含四碱基 密码子或琥珀密码子的识别序列。

8.如权利要求1所述的翻译系统，其特征在于，所述赖氨酰O-tRNA包含AGGA 的识别序列。

9.如权利要求1所述的翻译系统，其特征在于，所述CU(X)XXXAA序列为 CUCUAAA或CUUCCUAA。

10.如权利要求1所述的翻译系统，其特征在于，所述O-RS和赖氨酰O-tRNA 抑制终止或移码选择者密码子的效率至少相当于SEQ ID NO：30所示的PhE444G、 如SEQ ID NO：28所示的PhΔAD或PhΔAD的I41和/或S268突变体与SEQ ID NO：24或SEQ ID NO：26的O-tRNA联合时的50％。

11.如权利要求1所述的翻译系统，该系统包括其它O-RS和其它O-tRNA，其中 所述其它O-RS和其它O-tRNA所抑制的移码选择者密码子不同于所述赖氨酰 O-tRNA和优先加载所述赖氨酰O-tRNA的所述O-RS所抑制的移码选择者密码子。

12.如权利要求1所述的翻译系统，其特征在于，所述翻译系统对编码靶多肽的 靶核酸中的四碱基选择者密码子和终止选择者密码子均抑制。

13.如权利要求12所述的翻译系统，其特征在于，所述四碱基选择者密码子的序 列为AGGA，且终止选择者密码子的序列为TAG或UAG。

14.如权利要求1所述的翻译系统，该系统包括含四碱基选择者密码子的靶核酸。

15.如权利要求14所述的翻译系统，该系统包括所述靶核酸编码的蛋白质。

16.如权利要求15所述的翻译系统，其特征在于，所述蛋白质含有高谷氨酰胺。

17.如权利要求1所述的翻译系统，该系统包括含有四碱基选择者密码子和终止 选择者密码子的靶核酸。

18.如权利要求17所述的翻译系统，该系统包括由所述靶核酸编码的蛋白质，其 中所述蛋白质含有至少两个不同的非天然氨基酸。