[发明专利]富含结缔组织生长成分的骨髓组分的分离及其促进结缔组织形成的用途

说明书

本申请要求2003年7月9日提交的美国专利序列号60/485,445的权益，以整 体纳入本文作为参考。该申请也涉及2002年4月4日提交的美国专利申请序列号 10/116,729(2002年12月5日公布为美国专利申请公告号2002/0182664)，以整体 纳入本文作为参考。

本申请总地涉及促进组织生长的组合物和方法，具体涉及富含一种或多种结缔 组织(如骨)生长促进成分的骨髓分离物，形成该分离物的方法以及用该分离物促进 结缔组织生长的方法。

近年来，当在骨移植步骤中采用骨髓时，一般从髂嵴中抽取骨髓，并且不对该 骨髓进行任何次级加工就直接用作骨移植物。该骨髓抽取物的大部分是促进骨生成 作用最小的血液。而且，血液中大量的血小板释放出不良的生长因子，如PDGF(血小 板衍生生长因子)、TGF-β(转化生长因子β)和FGF(成纤维细胞生长因子)，在一些 情况下它们显示具有抑制骨形成的作用。

因此，需要分离骨髓的诸成分，具体是促进结缔组织形成的成分，和将该分离 成分用于结缔组织修复，如骨移植和软骨修复改进或替代技术。

在一个实施方式中，本发明提供了一种获得骨髓组分的方法。该方法包括：离 心含有全血和骨髓的生物样品，根据密度对样品的诸成分进行分离。该分离提供了 以下密度降低顺序的组分：(1)富含血细胞的组分；(2)暗黄层组分；(3)富含血小板 的组分和(4)血小板含量很少的组分。分离单独的或者与全部或部分富含血小板组分 混合的暗黄层组分，制备富含结缔组织生长促进成分的分离物。

在另一实施方式中，本发明提供了一种治疗病人的方法。该方法包括分离得到 包含促进结缔组织形成成分的骨髓组分，并将该骨髓组分植入病人的组织缺损部位。 根据本发明，在植入手术中进行该骨髓组分的分离。

在另一实施方式中，本发明提供了治疗病人的方法，包括获得病人的骨髓样品， 离心该样品根据密度将样品分成不同组分，这些组分包括富含组织促进成分的组分。 分离得到富含组织生长促进成分的组分将其植入病人中。根据本发明，在植入手术 中进行所述获得、离心、分离步骤。

在另一实施方式中，本发明提供了获得富含结缔组织生长促进成分的骨髓组分 的方法。该方法包括离心含有骨髓的生物样品，根据密度将该样品分成(不同)组分， 这些组分包括富含生长促进成分的组分。然后分离得到富含组织生长促进成分的组 分。

从本说明书中可以明白本发明的其它实施方式，以及特征和优点。

图1-6显示从6名不同供者抽取的含有全血和骨髓的生物样品中分开和分离富 含结缔组织生长促进成分的组分的测试结果，其中图1显示编号30500供者的测试 结果，图2显示编号30501供者的测试结果，图3显示编号30506供者的测试结果， 图4显示编号30526供者的测试结果，图5显示编号30527供者的测试结果，图6 显示编号30561供者的测试结果。

为了促进对本发明原理的理解，将参考本发明的某些实施方式，用具体化的语 言对其进行描述。然而应理解，它们不应限制本发明的范围，应认为本发明相关领 域的技术人员通常能够对示例性植入物进行改变和改进，以及对本文所述原理进行 进一步应用。

如上所述，本发明提供富含衍生自骨髓的一种或多种结缔组织(如骨)生长促进 成分的分离物，制备该分离物的方法和用该分离物促进结缔组织生长的方法。

全血包含以下成分：血浆、红细胞、白细胞和血小板。全血的液体部分称为血 浆，是一种蛋白质-盐溶液，其中悬浮着红细胞、白细胞和血小板。血浆的90％是水， 它占血液总体积的55％。血浆含有清蛋白(主要蛋白成分)、纤维蛋白原(部分负责凝 血)，球蛋白(包括抗体)和其它凝血蛋白。血浆起着各种功能，从维持合适血压到提 供一定量的凝血和免疫力所必需的蛋白质。通过将液体部分与悬浮于血液的细胞分 开而获得血浆。红细胞(红血球)所含的血红蛋白是一种在整个机体中携带氧气并赋 予血液红色的含铁蛋白。红细胞占血液体积的百分数称为“血细胞比容”。白细胞(白 血球)负责保护机体免受外界物质如细菌、真菌和病毒的侵袭。用于此目的的白细胞 有以下几种类型，如保护机体免受环境感染并破坏侵入的细菌和病毒的粒细胞和巨 噬细胞，和有助于免疫防御的淋巴细胞。血小板(凝血细胞)是血液的小细胞成分， 它通过粘结于血管内壁帮助凝血过程。血小板防止外伤和血管渗漏引起的大量失血。