[发明专利]钠离子通道SCN1A基因突变及基因突变检测方法和用途

权利要求书

1.钠离子通道SCN1A基因突变，其特征是：SCN1A的15号外显子第248个碱基由G突变为A，即发生G248A点突变；和SCN1A的26号外显子第443个碱基由T突变为A，即发生T443A点突变。

2.钠离子通道基因突变的检测方法，其特征是：包括如下步骤：

①抽提DNA样本；

②根据SCN1A或SCN2A基因外显子序列设计引物；

③PCR扩增SCN1A或SCN2A基因外显子；

④在一个或多个变性温度下，利用变性高效液相色谱分析上述产物；

⑤对上述分析的阳性样本进行基因测序。

3.根据权利要求2所述的钠离子通道基因突变的检测方法，其特征是：设计的SCN1A基因外显子1～25的上游引物分别为序列3～51中的奇数序列，其外显子1～25的下游引物分别为序列4～52中的偶数序列，其外显子26的51～362bp上游引物为序列53，下游引物序列为序列54；其外显子26的360～674bp上游引物为序列55，下游引物序列为序列56；其外显子26的672～987bp上游引物为序列57，下游引物序列为序列58；其外显子26的1010～1298bp上游引物为序列59，下游引物序列为序列60。

4.根据权利要求2所述的钠离子通道基因突变的检测方法，其特征是：设计的SCN2A基因外显子2和3的上游引物分别为序列61和63，其下游引物分别为序列62和64；外显子4和5的上游引物均为序列65，下游引物序列均为66；外显子6～17的上游引物分别为序列67～89中的奇数序列，外显子6～17的下游引物分别为序列68～90中的偶数序列；外显子18的1～262bp上游引物为序列91，下游引物为序列92；外显子18的159～480bp上游引物为序列93，下游引物为序列94；外显子19～27的上游引物为序列95～111中的奇数序列，外显子19～27的下游引物为序列96～112中的偶数序列；外显子28的101～600bp上游引物为序列113，下游引物为114；外显子28的601～1057bp上游引物为序列115，下游引物为116；外显子28的936～1401bp上游引物为序列117，下游引物为118。

5.根据权利要求2所述的钠离子通道基因突变的检测方法，其特征是：在变性高效液相色谱分析中，根据双螺旋百分比-温度曲线和温度-碱基对曲线，确定融解域的个数，来选择相应数量的变性温度，使片段所有融解域的碱基对发生部分变性。

6.根据权利要求5所述的钠离子通道基因突变的检测方法，其特征是：变性温度的确定分如下情况：

a.在双螺旋百分比-温度曲线中，双螺旋百分比从100％～0％的温度变化小于5℃，融解域只有一个，则选用单温度进行部分变性分析；

b、双螺旋百分比-温度曲线中双螺旋百分比从100％～0％的温度变化大于或等于5℃，或温度-碱基对曲线呈阶梯状，融解域有多个，则选择多个变性温度，根据所选温度下的双螺旋百分比-碱基对曲线，使每一个融解域分别发生部分变性。

7.根据权利要求1所述的钠离子通道基因突变应用于临床抗癫痫药物的筛选。